畜禽繁育技术 模块六畜禽人工授精技术、畜禽繁育技术 实训12精液稀释液的配制与精液稀释教案.docVIP

国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库 PAGE 1 实训12精液稀释液的配制与精液稀释教案 一、目的和要求 1．掌握常用精液稀释的配制方法 2．学会对常温、低温和冷冻三种保存方式的精液进行稀释。 二、材料与器械 1.电子天平、称量纸、耳匙，显微镜、擦镜纸，恒温磁力搅拌器、水浴锅。 2.蔗糖、葡萄糖、奶粉、新鲜鸡蛋、氯化钠、氯化钾、氯化镁、二水柠檬酸钠、氨苯磺胺粉、甘油、青霉素、链霉素、双重蒸馏水。 3.量筒、容量瓶、烧杯、三角烧瓶、小试管、水温计、铁架台、漏斗、平皿、镊子、玻璃注射器、定性滤纸、脱脂棉等。 4.新鲜精液。 三、内容步骤 （一）各种家畜精液常用稀释液配制 1．药品、试剂和玻璃器皿的准备 （1）蒸馏水或纯水要现用现制备。 （2）药品、试剂 要求用分析纯，奶液必须是当天的鲜奶，卵黄要取自新鲜鸡蛋。 （3）玻璃器皿用洗涤液洗净后用自来水反复冲洗掉洗涤液，然后用蒸馏水或纯水冲洗3次，沥干或40℃烘干水分，用纸将瓶口包好，放入干燥箱中升温至120℃消毒1h，备用。 2.认识常用稀释液配方的组成及特点。 （1）猪常温保存稀释液 配方一：称取葡萄糖8g，溶于100 ml蒸馏水中，使用前加入青霉素４０万IU。在15～20℃的温度条件下，这种配方的稀释精液可保存18～24 h。 配方二：称取葡萄糖5.0 g、二水柠檬酸钠0.5 g、溶于100 ml蒸馏水中，使用前加入卵黄３ml、青链霉素各10万IU。在10～25℃的温度条件下，这种配方的稀释精液可保存48 h。 配方三： 二水柠檬酸钠0.5 g、葡萄糖5.5 g、氨苯磺胺粉０.３克，溶于100 ml蒸馏水中。在25～30℃的温度条件下，这种配方的稀释精液可保存24～36 h。 （2）绵（山）羊低温保存稀释液配方 称取二水柠檬酸钠2.8 g、葡萄糖3.0 g、溶于100 ml蒸馏水。用时取上液80 ml、加新鲜卵黄20 ml，青、链霉素各10万IU。 （3）牛细管冷冻精液的稀释液配方 称取葡萄糖3.0 g、二水柠檬酸钠1.4 g、溶于100 ml蒸馏水中，取上液80 ml、加卵黄20 ml、青、链霉素各10万IU，配制成第一冷冻液。取第一冷冻液86 ml，加入甘油14 ml,混匀即配制成第二冷冻液。 3.配制方法步骤及要求 （1）称量：按电子天平称量步骤，在称量纸上准确称量各种稀释液基础液的试剂成分（图称量），放入烧杯中； （2）溶解：用量筒量取纯水，沿壁倒入烧杯中溶解试剂，可将烧杯置于在恒温磁力搅拌器上充分溶解； （3）定容：将液体转移到100 ml容量瓶中，要用少量纯水将烧杯冲洗3次以上，确保全部转移到容量瓶中定容。 （4）灭菌：将液体用三角漏斗过滤到盐水瓶中，盖严棉塞后，用煮沸消毒法消毒（见实训五），消毒后的基础液置于0～5℃的冰箱中可保存2~3天。灭菌后的基础液需冷却到40℃以下后方可加入青链霉素、卵黄等； （5）卵黄的制备：用75%的酒精棉球消毒外壳，待其完全挥发后，磕开鸡蛋，将蛋黄交错倒于两半个蛋壳内分离出蛋清，然后小心地将蛋黄倒在过滤纸上。小心地使蛋黄在纸巾上滚动，使其表面的稀蛋清被纸巾吸附。将卵黄移至纸巾的边缘，用针头挑一个小口，略倾斜使卵黄液缓缓流入量筒中，注意避免将卵黄膜倒入量筒中。再用同样的方法获取另一个鸡蛋的卵黄。 （6）卵黄液与基础液的混合：将定量的卵黄液从量筒倒入三角瓶中，将量取的基础液反复冲洗量筒中的卵黄，使其全部溶解入基础液中，摇匀，剩少许基础液溶解抗生素。 （7）如果用鲜奶作为稀释液的成分，可用8层纱布过滤后直接加入到稀释液中。 （8）加入抗生素：称取0.1克的青霉素和0.1克 （9）添加甘油，用量筒量取第一液47毫升，加入另一只三角瓶中，用注射器吸取3毫升消毒甘油，注入三角瓶中，摇匀。 （二）对常温、低温和冷冻三种保存方式的精液进行稀释 1.常温保存精液的稀释 采精后立即将精液置于30℃的水浴环境中，以防温度的变化。稀释液在采精前已经放在30℃的水浴锅内，稀释时，用玻璃棒引流，把稀释液沿容器壁慢慢加入精液，并轻轻摇动混合均匀，如需高倍稀释，应先加入稀释液总量的1/3～1/2,混合均匀后再加入剩余的稀释液，以防稀释打击。稀释结束后，镜检精子活力。猪的精液常温保存效果好。在精液稀释后，按一个输精量分装到特定的输精瓶(袋)中，封口，贴好标签后放入17℃冰箱内保存。 2．低温保存精液的稀释 应使用含有卵黄或奶液的稀释液，以防冷休克发生。稀释方法步骤同上，稀释后要采取逐步降温的方法，首先将稀释后的精液按照一个输精量(羊10～20个输精量)分装到试管中，封口，再包以数层棉毛巾或纱布，最外层用塑料袋扎好，防止水分渗入。把包装好的精液放到0℃～5℃冰箱中，经1～2 h精液即降至0℃～5℃。在保存过程中，要维持温度的恒定，防止升温。在特