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（生产管理知识）培养基 模拟生产验证方案 9 搅拌棒 1 搅拌 10 配制罐 1 1 配制 11 配制罐 2 1 配制 12 套筒过滤器 1 过滤 13 蠕动泵 1 泵液体 14 20L 不锈钢桶 2 容器 15 30L 不锈钢桶 3 容器 16 2L 烧杯 2 容器 17 10L 不锈钢桶 2 容器 6 物料 序号 物料名称 1 注射用水 2 蒸馏水 3 管制瓶、卡式瓶 4 胶塞 5 铝盖 6 胰酪胨大豆肉汤 7 75%乙醇 7 验证内容 7.1 判断标准 产品无菌性的可信限：95% 产品允许污染的概率：警戒限为＜0.05% ，可信限为＞0.1% 7.2 培养基配制、灭菌和过滤： 7.2.1 按 30g 胰酪胨大豆培养基溶于 1L 蒸馏水的比例配制适量的培养基溶液， 搅拌并加热溶解或直接量取 70℃以上的蒸馏水，搅拌溶解后，，将盛放培养基 的桶在蒸汽灭菌柜内 121℃灭菌 15 分钟，待灭菌后自然冷却 7.2.2 配制用于验证分装生产线的无菌性的培养基溶液体积应满足灌装 3000 支 以上的量（一般灌装5000 支左右）。 7.2.3 冷却后用已灭菌的 0.22um 的套筒过滤器过滤于已灭菌的相应容量的不锈 钢桶中。注：过滤过程应遵守无菌操作。 7.3 培养基无菌性试验： 将用于模拟灌装的胰酪大豆培养基另外用 50ml 试管配制 4 管（20ml/管），在 121℃灭菌 15 分钟，盖塞、封口后将其中 2 管在 20～25℃培养 7 天，另外 2 管 在 30～35℃培养 7 天。7 天内若各试管中应无任何微生物生长，则判断合格。结 果填于附表 2 7.4 培养基微生物生长性能试验： 将配制好的灭菌培养基分装于 10 支50ml 试管中（20ml/管），在其中４支管内 接种＜１００ＣＦＵ的枯草杆菌，和 1 支不接种枯草杆菌的TSB 试管（空白对照） 同时在30～35℃下培养 7 天，在另４支试管内接种＜１００ＣＦＵ的白色念珠 菌，和 1 支不接种白色念珠菌的ＴＳＢ试管（空白对照）同时在 20～25℃培养 ７天，培养过程中每天观察微生物生长情况，七天内若50%以上接种的各试管的 培养基应出现明显的所接种的微生物的生长，空白试验无菌生长，则判断合格。 结果填于附表 3 。 7.5 无菌灌装试验： 7.5.1 无菌灌装所用的瓶和塞塞经灭菌处理后，进行模拟灌装、轧盖。每瓶和托 盘都需标号，每盘上记录起始时间和结束时间。 整个过程应严格遵守相应的无菌灌装生产的标准操作规程。模拟灌装生产的全部 样品先在 20～25℃培养７天，再在 30～35℃下培养 7 天，一半倒置培养，一半 正立培养。培养过程中应每天观察微生物生长情况，若发现污染应明确记录瓶号、 瓶数。 7.5.2 阴性对照： 灌装过程中随机抽取 2 瓶不进行设备灌装直接手动加底塞、灌装培养基、封口， 与试验样品同条件培养作为阴性对照。。 7.5.3 随意地取出 8 支灌有培养基的灌装瓶，向挑选出来的 4 支瓶内逐个注入 0.1ml 的枯草杆菌混悬液（每 0.1ml 中CFU 少于 100 个），在 30～35℃下培养 7 天，向挑选出来的另4 支瓶内注入白色念珠菌混悬液（每0.1ml 中CFU 少