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第六章核酸 第一节概述 一、核酸的发现及研究概况 1868年瑞士医生F.Miescher （米歇尔）从外科绷带脓细胞的细胞核中分离得到一种含磷 很高的酸性物质，当时称它为“核素”，实际就是核酸和蛋白质的复合物。之后在很长时间 内，流行“四核昔酸假说，认为核酸是由等量的四种核背酸构成的，不可能有什么重要功能。 1928年英国的细菌学家F.Griffith （格里菲斯）发现肺炎双球菌的转化现象。肺炎双球 菌（Diplococcus pneumoniae）是一种病原菌，存在着光滑型（Smooth简称S型）和粗糙型 （Rough简称R型）两种不同类型。其中光滑型的菌株产生荚膜，有毒，在人体内它导致肺 炎，在小鼠体中它导致败血症，并使小鼠患病死亡，其菌落是光滑的；粗糙型的菌株不产生 荚膜，无毒，在人或动物体内不会导致病害，其菌落是粗糙的。格里菲斯将活的粗糙型菌和 加热杀死的光滑型菌混合液注射小鼠，可致病，而二者单独注射都无致病性。这说明加热杀 死的光滑型菌体内有一种物质使粗糙型菌转化为光滑型菌。 肺炎双球菌转化实验的结论：加热杀死的S菌中有一种“转化因子J能使R菌转化为 S菌，使小鼠死亡。格里菲斯没有对此现象进行进一步的研究。但这个实验为以后认识到DNA 是遗传物质奠定了基础。 1944年美国的0. Avery（艾州里）、麦克利奥特（C. Macleod）及麦克卡蒂（M. Mccarty）等 人在格里菲斯工作的基础上，对转化的本质进行了深入的研究（体外转化实验），首次证明 T DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质。他们从S型活菌体内提取DNA、RNA、蛋白 质和荚膜多糖，将它们分别和R型活菌混合均匀后注射人小白鼠体内，结果只有注射S型 菌DNA和R型活菌的混合液的小白鼠才死亡，这是一部分R型菌转化产生有毒的、有荚膜的S型菌所致，并且它们的后代都是有毒、有荚膜的。实质是S型的DNA或慕因与R 型活细菌DNA之间重组，使后者获得了新的遗传信息。外源DNA分子一旦找到它的内源同 源体，这两个分子就可进行遗传交换了。交换的结果是使外源DNA被整合，而使同源的内 源DNA分子从R型细菌的DNA小排斥出去，从而产生由R型细菌变为S型细菌的遗传转 化。 DNA 的真檢 由此说明RNA、蛋白质和荚膜多糖均不引起转化，而DNA却能引起转化。如果用DNA 酶处理DNA后，则转化作用丧失。 艾弗里于1944年发表论文指出“脱氧核糖型的核酸是肺炎球菌转化耍素的基本单位”。 其实验证据如下： 呂纯化的、有高度活性的转化要素的化学元素分析与计算岀来的DNA组成非常接近。 园纯化的转化要索在光学、超速离心、扩散和电泳性质上与DNA的相似。 冈其转化活性不因抽取去除蛋白质或脂类而损失。 可用胰蛋白酶和糜蛋白酶处理不影响其转化活性。 因用RNA酶处理也不不影响其转化活性。 0DNA酶可使其转化活性丧失。 艾弗里的论文发表后，有些人仍然坚持蛋白质是遗传物质，理由是： （1） 因认为蛋白相对分子质量大，结构复杂，二十种氨基酸的排列组合将是个天文数 字，可作为一种遗传信息。而DNA相对分子质量小，只含4种不同的碱基，人们一度认为 不同种的有机体的核酸只有微小的差异。 （2） 认为转化实验中DNA并未能提得很纯，还附有其它物质。 （3） 即使转化因子确实是DNA,但也可能DNA只是对荚膜形成起着直接的化学效应, 而不是充当遗传信息的载体。 1952年A.D.Hershey （赫尔希）和M.Chase （蔡斯）的T2噬菌体感染实验进一步证明 T DNA是遗传物质的结果。T2噬菌体是一类专门寄生在细菌体内的病毒，具有蝌蚪状外形, 头部呈正20面体，外壳由蛋白质构成，头部包裹DNA作为遗传物质。他们用35s标记蛋白 质，用32p标记核酸。使标记的噬菌体感染大肠杆菌，经短期保温后，噬菌体就附着在细菌 ±o然后用搅拌器（10000转/分）搅拌儿分钟，使噬菌体与大肠杆菌分开，再用高速离心机 使细菌沉淀，分析沉淀和上清中的放射性。实验结果表明：当用3%标记的噬菌体感染时， 放射性只存在于细胞外面，即噬菌体的外壳上；当用32p标记的噬菌体感染时，放射性在细 所以说DNA是遗传物质。T2 口筮菌体放射性同位素 标记的噬1?体 与细■混合?堪菌体侵集细离心.检测悬浮液 和沉淀中的放射性 間位索在搅拌II中搅拌. 使细菌外的08菌 体与细菌分薦OfilK体侵集细蔺时. 仅DNA 所以说DNA是遗传物质。 T2 口筮菌体 放射性同位素 标记的噬1?体 与细■混合? 堪菌体侵集细 离心.检测悬浮液 和沉淀中的放射性 間位索 在搅拌II中搅拌. 使细菌外的08菌 体与细菌分薦 OfilK体侵集细蔺时. 仅DNA进入细葡细胞. 而毎白外壳没有进入 叩标记DNA 更有说服力的噬商体实验 1950年Char