（新教材）高中生物人教版选择性必修三学案+练习：3.1 重组DNA技术的基本工具 （含解析）.doc

PAGE 第3章　基 因 工 程 第1节　重组DNA技术的基本工具　 必备知识·素养奠基 一、基因工程的诞生和发展 判一判:基于基因工程相关基础理论的突破和技术的创新,判断下列说法的正误。 1.1953年,沃森和克里克建立了DNA分子双螺旋结构模型,并用实验证明了DNA分子的半保留复制。 (×) 提示:DNA分子半保留复制是梅塞尔森和斯塔尔用实验证明的。 2.1970年,在细菌体内发现了第一个限制酶,后来又发现了多种限制酶、DNA连接酶等。 (√) 3.1972年,伯格首先在体外进行DNA改造,并构建了第一个体外重组DNA分子。 (√) 4.1983年,科学家采用花粉管通道法培育了世界上第一例转基因烟草。 (×) 提示:第一例转基因烟草是用农杆菌转化法培育的。 5.1984年,我国科学家朱作言领导的团队培育了世界上第一条转基因鱼。 (√) 6.基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的。 (√) 二、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 1.来源:主要来自原核生物。 2.特点:具有专一性。 (1)识别DNA分子的特定核苷酸序列。 (2)切割特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 3.结果: 限制酶来源于原核生物,为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA? 提示:细菌DNA缺乏特定的核苷酸序列,限制酶无法识别这些DNA,故不能剪切。 三、DNA连接酶——“分子缝合针” 1.作用:将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 2.种类: 种　类 来　源 特　点 E.coli DNA连接酶 大肠杆菌 只能“缝合”具有互补黏性末端的双链DNA片段 T4DNA 连接酶 T4噬菌体 既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端 四、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1.种类:质粒、噬菌体、动植物病毒等。 2.常用载体——质粒 (1)本质:质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。 (2)作为载体的三个条件。 ①质粒DNA分子上有一个或多个限制酶切割位点。 ②能在细胞内自我复制,或整合到受体DNA上,随受体DNA同步复制。 ③含有特殊的标记基因。 五、DNA的粗提取与鉴定 1.实验原理: (1)DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面有差异,选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。 ①DNA不溶于酒精,某些蛋白质溶于酒精,分离DNA和蛋白质。 ②DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液。 (2)DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。 2.方法步骤: (1)研磨:取30g洋葱切碎,倒入10 mL研磨液研磨。 (2)除杂:漏斗中垫上纱布过滤后,在4 ℃冰箱静置后取上清液,1 500 r/min的转速下离心后取上清液。 (3)提取:加入体积相等、体积分数95%酒精,溶液出现白色的丝状物是DNA。 方法一:用玻璃杯按一个(填“一个”或“两个”)方向搅拌,卷起丝状物,用滤纸吸去上面的水分。 方法二:10 000 r/min的转速下离心5 min,取沉淀物晾干。 (4)鉴定: 项目 A B 2 mol/L的NaCl溶液 5 mL 丝状物或沉淀物 不加 加入 二苯胺试剂4 mL 沸水中加热5 min 现象 无色 蓝色 DNA的鉴定和还原糖的鉴定都需要加热,它们有什么不同? 提示:还原糖加斐林试剂后,置于55～65 ℃热水中加热;而DNA加二苯胺试剂后,置于沸水中加热。 关键能力·素养形成 知识点一　基因工程中的工具酶 1.限制酶: (1)限制酶的作用。 限制酶具有特殊的识别和切割功能,在基因工程中,一方面被用于切割含目的基因的DNA分子,以获取目的基因;另一方面用于切割载体。 (2)识别序列的特点:呈现碱基互补对称,无论是奇数个碱基,还是偶数个碱基,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如以中心线为轴,两侧碱基互补对称; 以为轴,两侧碱基互补对称。 (3)限制酶切割方式: ①上下交错切割:限制酶在DNA双链的不同位置切割DNA(即在识别序列的中轴线两侧切割),产生的DNA片段的末端两条链一长一短,不是平齐的,即黏性末端, 如图: ②上下对称切割:限制酶在DNA双链的相同位置切割DNA(即沿着识别序列的中轴线切割),这样产生的末端两条链平齐,即平末端,如图: 2.DNA连接酶: (1)作用: 将具有相同或互补黏性末端以及具有平末端的DNA片段“缝合”成新的DNA分子。 (2)连接方式: DNA连接酶可把黏性末端和平末端之间的缝隙“缝合”起来,相当于把梯子两边的扶手的断口连接起来,形成