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第2节 微生物的培养技术及应用
一 微生物的基本培养技术
必备知识·素养奠基
一、培养基的配制
1.培养基的概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基,用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
2.培养基的分类:按照物理性质不同分为两类。
(1)液体培养基:呈液体状态的培养基,不加入凝固剂(如琼脂)。
(2)固体培养基:呈固体状态的培养基,加入凝固剂(如琼脂)。
3.营养组成:各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
4.培养基特殊需求:
(1)培养乳酸杆菌时,在培养基中添加维生素。
(2)培养霉菌时,将培养基调至酸性。
(3)培养细菌时,将培养基调至中性或弱碱性。
(4)培养厌氧微生物时,需要提供无氧的条件。
有同学认为液体培养基含有水,而固体培养基是没有水的,这种想法对吗?为什么?
提示:不对。液体培养基和固体培养基都含有水分,它们的区别为是否添加凝固剂。
二、无菌技术
1.无菌技术关键:防止杂菌污染。
2.消毒与灭菌:
(1)概念:
①消毒:使用较为温和的物理、化学或生物等方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
②灭菌:使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。
(2)类型与方法:
连一连:将无菌技术类型、常用方法和适用对象用线连起来。
在无菌技术中,为什么许多实验操作都要在酒精灯火焰附近进行?
提示:酒精灯火焰周围温度高,细菌少,甚至无菌,这样可以避免周围环境中微生物的污染。
三、微生物的纯培养
1.微生物纯培养的概念:由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物,获得纯培养物的过程就是纯培养。
2.酵母菌的纯培养:
(1)纯培养的原理:设法在培养基上得到由单个微生物繁殖形成的纯培养物(单菌落)。
(2)纯培养方法:平板划线法和稀释涂布平板法。
(3)纯培养过程:
①制备培养基:配制培养基→灭菌→倒平板
②接种和分离酵母菌:用平板划线法在马铃薯培养基表面接种酵母菌。下列接种过程正确的顺序是baefcgd
③培养酵母菌:待菌液被培养基吸收,将接种后的平板和一个未接种的平板倒置,放入28 ℃左右恒温箱中培养24~48h。
(4)结果分析与评价:
结合酵母菌纯培养的过程,判断下列分析的正误:
①未接种的平板上没有菌种,此实验没有必要培养。 (×)
提示:培养未接种的平板起到对照作用,可以检验培养基的制备是否合格。
②在未接种的培养基表面长出了菌落,说明培养基制备不合格。 (√)
③若无菌操作合格,在接种酵母菌的培养基上应观察到不同形态、不同颜色的酵母菌菌落。 (×)
提示:应该是观察到形态、颜色一致的酵母菌单菌落。
④如果将酵母菌放置在35 ℃恒温箱中培养,相同时间后观察,菌落会比28 ℃ 条件下的大,数量多。 (×)
提示:酵母菌适宜生长温度为28 ℃,35 ℃条件下由于温度较高,酵母菌生长慢。
⑤某同学使用平板划线法纯化酵母菌,培养48 h后,只在培养基的第一划线区域长出密集的菌落,其他区域未长出菌落,可能是这位同学第二次灼烧接种环未冷却就直接划线导致的。 (√)
将接种后的平板放在恒温培养箱中培养有必要吗?为什么?
提示:有必要。恒温培养箱可以提供微生物生长的适宜温度。
关键能力·素养形成
知识点一 培养基的配制
1.培养基的成分及功能:
营养要素
来 源
功 能
碳源
(提供
碳元
素的
物质)
无机
碳源
NaHCO3等含碳无机物
①构成细胞物质和一些代谢产物;
②有机碳既是碳源又是能源
有机
碳源
糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等
氮源
(提供
氮元
素的
物质)
无机
氮源
铵盐、硝酸盐等
将无机氮合成含氮的代谢产物
有机
氮源
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物
生长因子
(生长必不
可少的微
量有机物)
维生素、氨基酸、碱基
①酶和核酸的组成成分;
②参与代谢过程中的酶促反应
水
外界摄入
①良好的溶剂
②维持生物大分子结构的稳定
无机盐
无机物
为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素
【特别提醒】有关培养基营养物质的三点提醒
(1)培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。
①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。
②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。
(2)微生物需要补充生长因子,是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。
(3)微生物需要量最大的是碳源。能合成含碳有机物的是自养型,反之则为异养型。
2.培养基的种类:
分类
标准
培养基种类
培养基特点
作 用
物理
性质
固体培养基
加凝固剂,
如琼脂
微生物的分
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