现代医学试验学骨髓细胞微核试验.ppt

L o g o 骨髓细胞微核实验 ? 微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒 物的快速检测方法。 ? 微核 (Micronucleus,MCN) 是指细胞中主核之外的颗粒，染 色与细胞核一致，相当于细胞直径的 1/20-1/5 ，呈圆形或 杏仁状。是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有 丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。 实验原理 the mechanism of micronucleus formation in the PCEs and NCEs PCE ： polychromatic erythrocytes ； NCE ： normochromatic erythrocytes 机理： 1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环 和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中 2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从 而遗留在细胞质中 结论： 微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的 染色体 完整性改变 和 染色体分离改变。 实验原理 无核细胞 红细胞 有核细胞中 微核难与正常核分叶 及核突出物区别 微 核 实 验 红细胞的分化成熟过程 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成 9 环磷酰胺（ CTX ） ? 最常用的烷化剂类抗肿瘤药。 ? 在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰 胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。 ? 副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、 中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。 ? 具有显著的遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初 期时给予可致畸胎。 ? 用药后 24-30 小时，骨髓中微核形成达峰。 10 结果 示小鼠骨髓嗜多染 红细胞中一个微核 示小鼠骨髓正常 嗜多染红细胞 11 示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核 12 示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核 Giemsa 染色 ? PCE 胞质内含 有核糖体，染 色呈灰蓝色； MCN 多数为 圆形，嗜色性 与核质一致， 呈紫红色或蓝 紫色 ? NCE 的核糖体 已消失，被染 成淡桔红色。 NCE PCE MCN 实验目的 1. 用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型 2. 观察小鼠骨髓嗜多染红细胞（ PCE ）微 核 ? 【 Animal 】 小鼠是微核试验的常规动物，通常用 7 ～ 12 周龄， 体重 18 ～ 20g 的小鼠。 ? 【 Reagents 】 小牛血清 Giemsa 染液 环磷酰胺 实验动物及试剂 实验分组和染毒方法 环磷酰胺 40mg/kg 模型组 等体积溶剂 对照组 染毒方法（ 30h 两次给药法）：两次给受 试物间隔 24h ，第二次给药后 6h 取材 处死 ：小鼠颈椎脱臼处死； 取股骨 ：防止出血； 取骨髓 ：小牛血清 1 滴 推片 ： 30 度角； 晾干 ：一定要干； 固定 ：甲醇固定 10min, 需要晾干； 染色 ： Gimesa 染液染色（ 10~15min ） 冲洗： 蒸馏水冲洗，晾干 阅片 : 观察微核。 染 毒 后 操 作 步 骤