2021课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

尿素分子的立体结构 课题 2 土壤分解尿素的细菌的分 离与计数 课题目的 1. 从土壤中分离出 能够分解尿素的细菌 2. 统计 每克土壤 样品中究竟含有 多少这样的细菌 一、研究思路 ( 一 ) 筛选菌种 1 实例： 寻找耐高温的 DNA 聚合酶 PCR 技术：要求使用耐高温（ 93 0 C ） 的 DNA 聚合酶。 耐高温 的酶 寻找 耐高温 生物体 寻找 Taq 细菌 耐高温 环境（热泉、火山口） 筛选原因 : 因为热泉的 高温 条件 淘汰了绝大多数微生物 ， 使 耐热的 Taq 细菌保留 下来。 启示： 寻找目的菌种时要根据它对 _______________ ，到 生存环境的要求 相应的环境中去寻找。 2 实验室中微生物的 筛选原理 人为提供 有利于目的菌株生长 的条件 ( 包括营养、 温度、 pH 等 ) ，同时 抑制或阻止其他微生物 生长。 思考： 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和 氮源的分别是什么物质？ 碳源 ：葡萄糖、尿素 氮源 ：尿素 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而 生存。 3 选择培养基： 特定种类的微生物生长 ，同 在微生物学中，将允许 ______________________ 时 _________________________ 抑制或阻止其他种类微生物 生长的培养基。 加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等 真菌能生长 不加含碳有机物的无碳培养基 ——分离自养型微生物 结果： 培养一定时间后， 该菌数量上升 ，再通过稀释涂 布平板等方法对它进行纯化培养分离。 如何对细菌进行计数？ 1 显微镜直接计数： 利用 胞计数板 血球计数板 ( 血细 镜下计算一定容积里 ） ，在显微 样品中微生物的数量。 缺点：不能区分死菌和 活菌 2 稀释涂布平板法（间接计数） 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 ( 二 ) 统计菌落数目 方法 运用 稀释涂布平板法 来 统计 样品中的 活菌 数。 原理 1 个菌落 ← 1 个活菌 注意事项 ①选择菌落数在 30 ～ 300 的平板上计数。 ②需培养计算出 三个或三个以上 的平板菌 落求 平均数 。（为了减少实验误差） ③统计的菌落往往比活菌的实际数目 低 。 原因：当两个或多个细胞连在一起时平板上 观察到的只是一个菌落 看课本 P22 ，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如 果有问题，错在哪？ 第一位同学：没有 重复实验 （至少涂布 3 个平板） 第二位同学： A 组结果误差过大，不应用于计算平均值 计算公式： 某同学在稀释倍数为 10 6 的培养基中测得平板上菌落数 的平均数为 234 ，那么每克样品中的菌落数是（涂布平 板时所用稀释液的体积为 0.1ml ） A. 2.34 × 10 8 B. 2.34 × 10 9 C. 234 D. 23.4 每克样品中的菌株数 = ( ) B C ÷ V ）× M （ ( 三 ) 设置对照实验 设置对照的目的： 排除实验组中非测试因素对试验结果的影响，提 高实验结果的可信度。 阅读 P22 ～ 23 页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出 的问题。 (1)A 同学出现此结果的可能原因？ ⑴土样不同 ⑵培养基污染 ( 或混入了其他的含氮物质 ) (2) 设置对照实验，帮助 A 同学排除上述两个可能影响实验 结果的因素？ 方案一： 由其他同学 用与 A 同学相同土样 进行实验 A 无误 ； 结果预测： 如果结果与 A 同学一致，则证明 ______ 如果结果不同，则证明 A 同学存在 培养基的配 __________________ 制有问题。 __________ 方案二： 将 A 同学配制的培养基在 不加土样 的情况下进 行培养，作为 空白对照 ，以证明培养基是否受到污染。 这个实例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少 二、实验设计 实验流程： 土壤取样 制备培养基 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察 菌落计数 （一）土壤取样 “微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多 大约 70% — 90% 是细菌 从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。 先铲去 表层土 3cm 左右 ，再取样，将样品装入事先准备好的信 封中。 （二）制备培养基 制备 选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备 牛肉膏蛋白胨培养基 思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ （对照作用） 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落 数目应明显 多于 选择培养基上的数目，因此， 牛肉膏蛋 白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起 到了 选择 作用。 （三）样品稀释涂布平板 稀释倍数为 10 ～ 10 。