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植物组织培养 绪论P1 第一章植物组织培养的基本原理P3 第二章植物组织培养的基本原理P6 第三章植物器官和组织培养P11 第四章胚胎培养及离体授粉P16 第五章花药和花粉培养P20 第六章植物细胞培养P24 第八章 原生质体培养P27 第九章 植物离体繁殖P30 第十章无病毒苗木培育P33 植物组织培养基本操作P35 第一章 植物组织培养的基本原理 第一节：植物组织培养实验室 一、 实验室要求 环境要求：理想的植物组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方，最 好在常年主风向的上风方向，尽量冰少污染。规模化生产的实验室最好建在交通方祓的地方， 便于产品的运送。 需考虑两个方面：一、所从事实验的性质 二、实验室规模 实验室设置的基本原则：科学、高效、经济和实用。 二、 实验室组成 （一） 基本实验室 基本实验室包括准备室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是植物组织培养实验所必须具 备的基本条件。如进行工厂化生产，年产4万-20万，需3-4间实验用房，总面积60平方 米 实％室必须满足3个基本需要：实验准备（培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌）、 无菌操作和控制培养。 1、 准备室 功能：进行一切与实验有关的准备工作:器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养 器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 要求：20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同 时工作；同时要求通风条件好,便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。 设备：准备室应具备工作台、柜橱、水池、仪器、药品等。 分类： 分体￡-研究性质实验室,可将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌室等， 功能明确，便于管理，不适于大规模生产。 通间式-规模化实验室，设计成大的通间，试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。 便于程序化操作与管理，减少各环节间的衔接时间，提高工作效率。还便于培养基配制、分 装和灭菌的自动化操作程序设计，减少规模化生产的人工劳动，更便于无菌条件的控制和标 准化操作体系的建立。 2、 无菌操作室 功能：也叫接种室，进行材料的离体无菌操作，是植物离体培养研究或生产中最关键的一］ 希求：房间_般不宜过大，10-20平方米即可。要求封闭性好，干燥清袴，能较长时间保 持无菌,因此不宜设在容易受潮的地方；为便于消毒处理，地面及内墙塵都应采用防水和耐 腐巫蒜料；地面要求平坦无缝，便于清洁；为了保持清洁，无菌室应防止空气对■流。 一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处理，处理方法是甲醛和高猛酸钾熏蒸,并 需定期灭菌处理，还可用紫外线照射1-2h/周,或每次使用前，照射10-30mi 1】。 设备：无菌操作室安装有紫外灯粘箜调，工作台和搁架,还有超净工作台和整套灭菌接种 仪器、药品等。 3、 培养室 功能：对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养，实验材料进行 培养的场所。 要求：10-20平方米左右。要求能够控制光照和温度，并保持相对的无菌环境。因此， 培养室应保持清洁和适度干燥;为满足植物培养材料生长对气体的需要，还应安装排风窗和 换气扇等换气装置;为节省能源和空间，应配置适宜的培养架,并应安装日光灯照明。 研究用实验室，通常可扌艮据光照时间设置成长日照、中日照、短日照培养室,也可以根据温 度设置成高温和低温培养室,每一个培养室的空间不佥过大，便于对条徉的均匀控制。进行 精细培养纂型如细胞培养和原生质体培养,可采用光照培养箱或人工气候箱代替培养室。 设备：培养架、光照培养箱或人工气候箱、边台用于拍摄培养物生长状况，除湿机、显 微镜、温湿度计、空调等。 4、 缓冲间 易盛进入无菌室前的缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。人员在此换上工 作服、拖鞋、口罩，才能进入无菌室和培养室。 要求：3-5平方米,在准备室外或无菌操作室外，应保持清洁无菌；备有鞋架和衣帽挂钩。 设备：1-2盏紫外灯对衣物进行灭菌、灭菌工作服、拖鞋、口罩。 （二） 辅助实验室 根据研究或生产的需要而配套设置的专门实验室，主要用于细胞学观察和生理生化分析 等。 1「细胞学实验室 功能：对培养材料进行细胞学鉴定和研究， 分为制片室和显微观察室。 制片是获取显微观察数据的基础，制片室配备有切片机、磨刀机、温箱及样品处理和切片 染色设备，通风橱和废液处理设施。 显微观察室主要有显微镜和图像拍摄、处理设备。 要求：明亮、清洁、干燥、防止潮湿和灰尘污染。 2、生化分析实验室 培养细胞产物为主要目的实验室，应建立相应的分析化验实验室，随时对培养物成分进 行取样检查。大型次生代谢物生产，还需有效分离实验室。 第二节仪器设备和器皿用具 一、基本设备配置 （一） 常规设备 1、 天平 植物组织培养实验室需要不同精度的天平。 感量0.