第一章微生物检验鉴定技术.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （Oxidase） * * * * * * * * * * 2021/2/6 * 第二节 微生物常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察 1、微生物的形态结构观察 微生物的形态结构观察主要是通过染色,在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察,直观地了解细菌在形态结构上特性,根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。 2、微生物培养特性观察 E. Coli (G-) 绿脓杆菌单鞭毛 S. aureus (G+) 梭状芽孢杆菌 2021/2/6 * 曲霉 青霉 酵母 炭疽芽孢 2021/2/6 * 革兰染色法,丹麦病理学家C.Gram 创立（1884 ） （1）涂片: （2）晾干: （3）固定 （4）结晶紫色染色:1min。 水洗 （5） 媒染:滴加卢哥氏碘液,媒染1min。 水洗 （6） 脱色:将玻片倾斜,连续滴加95%乙醇脱色20~25s至流出液无色,立即水洗。 （7） 复染:滴加蕃红复染5min。水洗 （8） 晾干:晾干或者用吸水纸吸干。 （9） 镜检:先用低倍,再用高倍,最后用油镜。 （10）实验完毕后的处理: ①浸过油的镜头:a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2~3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2~3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。 ②细菌染色玻片用废擦镜纸将香柏油擦干 2021/2/6 * Gram’s staining 2021/2/6 * 第二节 微生物常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察 1、微生物的形态结构观察 2、微生物培养特性观察 微生物培养特性的观察是微生物检验鉴别中的一项重要内容。 １）细菌的培养特征 包括以下内容:在固体培养基上,观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。 细菌在液体培养基中生长性状观察A.深浊度:观察是否透明、轻度浑浊、中度浑浊或极度浑浊,还有均匀浑浊、颗粒状浑浊、絮状浑浊。B.沉淀:试管底有无沉淀,沉淀物呈颗粒状、粘稠状或絮状。轻摇时云雾状、絮状或发辫状升起。C.表面:有无菌膜及附着于管壁的菌环D.色素及气味细胞在固体培养基上菌落生长性状观察A.大小:菌落直径在1mm以下为露滴状菌落;1-2mm为小菌落;2-4为中等大菌落;4-6mm或更大为大菌落。B.形状:有圆形,有规则形、根足形、菌丝状等C.边缘:有整齐、锯齿状、纤毛状、卷发状等D.表面:有光滑、湿滑、粗糙、颗粒状、皱丝状、同心状、放射状等E.降起度:有角平、隆起、脐状、扭扣状F.颜色:有无色、白色、灰白色、金黄色、柠檬色、绿色、红色等G.透明度:有透明、半透明、不透明等 2021/2/6 * 一、形态结构和培养特性观察 1、微生物的形态结构观察 2、微生物培养特性观察 １）细菌的培养特征 ２）霉菌酵母菌的培养特征:大多数酵母菌没有丝状体,在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似,只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似,有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。 霉菌有分支的丝状体,菌丝粗长,在条件适宜的培养基里,菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色,因而菌落边缘和中心,正面和背面颜色常常不同,如青霉菌:孢子青绿色,气生菌丝无色,基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。 2021/2/6 * 第二节 微生物常规鉴定技术 二、生理生化试验 微生物生化反应:指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。 　　微生物检验中常用的生化反应有: 糖或醇类发酵试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（MR）试验 靛基质（Indole）试验 过氧化氢酶试验 硝酸盐还原试验 明胶液化试验 尿素酶（Urease）试验 氧化酶试验 硫化氢（H2S）试验 三糖铁（TSI）琼脂试验 氨基酸脱羧酶的测定 耐盐性试验 卵磷脂酶的测定 石蕊牛奶