细胞培养知识.docVIP

细胞培养知识 细胞培养知识(一) 1冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后，须立即放入37 ° C水槽屮快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意 水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注童安全，预 防冷冻管Z爆裂。 2细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO? 除少数特别注明对DMSO敏感Z细胞外，绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞)，在解冻Z后，应直接放 入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶屮，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大 部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 3可否使用与原先培养条件不同Z培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供Z培养条件不同Z培 养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4可否使用与原先培养条件不同Z血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大 的煤响。来白不同物种的血清，在一些物质或分了的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成 细胞无法存活。 5 何谓 FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum)和 FCS (fetal calf serum)是相同的意思,两 者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum)则是指小牛血清。HS (horseserum)贝！］是指马血清。 6培养细胞时应使用5 %或10% C02?或根本没有影响？ 一般培养基屮大都使用HC03-/C032-/II+作为pll的缓冲系统，而培养基屮NaIIC03的含量将决定细胞培 养时应使用的C02浓度。当培养基屮NaHC03含量为每公升3. 7 g时，细胞培养时应使用10 % C02；当 培养基屮NaHC03为每公升1.5 g时，则应使用5 % C02培养细胞。 7何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基木数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 8培养基屮是否须添加抗生索？ 除于特殊筛选系统屮外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。 9附着性细胞继代时所使用Ztrypsin-EDTA浓度？应如何处理？ 一般使用Z trypsin-EDTA浓度为0.05% trypsin-0. 53mMEDTA. 4 Na0第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管屮，保存于-20 ° C,避免反复冷 冻解冻造成trypsin Z活性降低，并可减少污染之机会。 10悬浮性细胞应如何继代处理？ 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶屮，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶 口端稍微抬高，右?到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞Z培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜 培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。 11欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？ 欲冋收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约l,000rpm), 5 - 10分钟，过高Z转速，将造成细胞 死亡。 12细胞Z接种密度为何？ 依照细胞株基木数据上Z接种密度或稀釋分盘Z比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无 法生长之一重要原因。 13细胞冷冻培养基Z成份为何？ 动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMS0 (dimethyl sulfoxide)和90 - 95 %原 来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合Z。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO肓接 加入细胞液屮，必须使用前先行配制完成。 14 DMS0之等级和无菌过滤Z方式为何？ 冷冻保存使用之.DMS0等级，必须为Tissue culture grade DMSO (如Sigma D2650),其木身即为无 菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4。C,避免反复冷冻解冻造成DMSO Z 裂解而释出有害物质，并可减少污染Z机会。若要过滤D.MSO,则须使用耐DMSO ZNylon材质滤膜。 15冷冻保存细胞Z方法？ 冷冻保存方法一:冷冻管置于4 ° C 30~60分钟?(-20 ° C30分钟*) - -80 ° C 16~18小时(或隔夜) 一液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机屮毎分钟降 1-3 ° C至-80 ° C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ° C不可超过1小时，以防止 冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80。C冰箱屮，惟存活率稍微 降低一些。 16细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？ 冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial,融合瘤细