兽医药理学试验.ppt

? 实验仪器、设备 ? 仪器：注射器，针头，天平，鼠笼。 ? 药物：四氯化碳、硫喷妥钠 ? 实验内容 ? 给健康小白鼠注射四氯化碳（ 0.1 mL/10g) ，造成肝损伤， 后用 0.3% 硫喷妥钠注射 (0.15 mL/10g) ，与健康小白鼠对 照， 比较它们麻醉出现及维持的时间的不同； ? 解剖所有小白鼠，分别观察它们肝和肾的病理变化，并 与健康小白鼠比较。 ? 实验记录 肝脏损伤对药物作用的影响 鼠号 体重（ g ） 硫喷妥钠剂 量（ mL ） 注射时间 麻醉开始时 间 麻醉维持时 间 健康鼠 肝损鼠 注意事项 “麻醉开始时间“为小鼠从腹腔注射硫喷妥钠溶液后至翻正反射消失时间； “麻醉消失时间”为从翻正反射消失至翻正反射恢复的时间。 实验六 药物敏感性实验 ? 学习内容 ? 药物敏感实验——纸片法 ? 定量药敏实验——试管二倍稀释法 ? 学习要求 ? 掌握两种药物敏感实验的原理、方法及注意事项。 ? 抗菌药物敏感性试验（ AST ，简称药敏试验） ： ? 用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。 常用最低抑菌浓度（ MIC ）表示，即体外能够抑制细菌 生长的最低药物浓度。通常根据 MIC 结合常用剂量时体 内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏 感或耐药的界限，给出 S （敏感）、 I （中介）、 R （耐 药）等定性的结果，方便临床用药。 ? 检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。 用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药 菌株的流行。 为经验用药提供参考依据。 ? 方法：扩散法（纸片法）、稀释法（有琼脂稀释法和液 体稀释法） ? 药敏纸片的人工制作 ? 定性滤纸用打孔器打成直径 6mm 的圆片，每 100 片放入 一小瓶中，160℃干热灭菌 1---2 小时，或用高压灭菌 （ 6.8kg30min ）后在60℃条件下烘干。（此应提前做 好） ? 抗菌药物的浓度（指有效药物浓度） 青霉素 200U/ml 其它抗菌药物 1000ug/ml 磺胺类药物 10mg/ml 中草药制剂 1g/ml 庆大霉素 4 万单位 /ml ，稀释为 1000 单位 /ml 。 ? （临床上可按照药品使用说明书，如上面标明 5 克本品可拌 50 千克 饲料，其换算方法为 l 克本品可拌 10 千克饲料，也就是 1 克本品拌 l0000 克饲料，相当于药品浓度为 l 克本品加 l0000 毫升蒸馏水。） ? 用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液 1ml ，加入 100 片纸片中，置冰箱内 1 — 2 小时，用下列方法烘 干： ? 培养皿烘干法：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿 中，于37℃的温箱内保持 2--3 小时即可干燥，或放在 无菌室内过夜干燥。 ? 将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱 内保存备用。并用标准敏感菌株做敏感性实验， 记录抑菌环的直径。 ? 干燥的药敏纸片可保存 6 个月。 ? 使用前用标准的敏感菌株做药物敏感实验，若抑菌环 比原来小，则表明该纸片已失效。 ? 纸片法 ? 每组约 7-8 个平皿（每人 1 个），每个平皿约 20 毫升琼 脂培养基，即约 200ml 。按照每组 500 毫升琼脂培养基、 100 毫升肉汤培养基准备。每平皿约 4 张纸片，每班约 240 张以上。 ? 将琼脂培养基熔融后，每个平皿倒入约 20 毫升，晾干 后，用玻棒蘸含菌棉球（玻棒、棉球均事先消毒）涂 抹均匀后晾干。 ? 用镊子夹纸片，每个平皿贴 4 张纸片，要使纸片全部紧 贴培养基。为保证均匀，可于平皿背部划出贴纸片点。 ? 36 摄氏度培养过夜。测量宽度。 ? 试管稀释法 ? 每组 2 排试管，每排 10 支。共 80 支。 ? 将庆大霉素用肉汤稀释液成 64 微克 / 毫升。每班 20 毫升 即可。 ? 挑选 10 支无菌试管编号 1 — 10 。 ? 无菌加入 1.0 毫升肉汤至第 2 到 10 管内。 ? 将 64 微克 / 毫升庆大霉素液体，分别加 1.0 毫升至第 1 、 2 管，将第 2 管混合后取 1.0 毫升至第 3 管，依次至第 9 管， 再从第 9 管取 1.0 毫升丢去，第 10 管不加抗生素作阳性 对照。 ? 试管稀释法 ? 另准备肉汤管不加抗生素、细菌作阴性对照。 ? 第 1 — 10 管分别加入已增菌 6 小时的细菌浓度约为 105- 106cfu/ml 菌液 1.0 毫升（细菌菌龄为 16-18 小时， McFarland No 0.5 管 细菌浓度 1.5 × 108cfu/ml ，然后 用用肉汤 1 ： 200 稀释）。 ? 培养和结果判读：35℃培养 16-24 小时，肉眼观察有无 细菌生长。阳性可见混浊生长，阴性可见澄清。 ? 最终各试管庆大霉素浓度：