细胞培养的基本技术.pptVIP

2021/3/13 * 细胞分裂指数 计算分裂细胞占全部细胞中比例的方法, 以表示细胞的增值程度。一般要计算和观察1000个细胞中的细胞分裂相数。 方法:细胞接种于放置小玻片的培养瓶内,每24h取出一个小玻片,95％酒精固定,吉姆萨染色。计算出1000个细胞中分裂相平均数值和所占百分比。按所测的百分数逐日顺序绘制成图。 2021/3/13 * 细胞生长曲线 利用细胞计数法进行 同一种密度准确接种细胞,以7－10天能长满而不发生生长抑制为度 每天取三瓶细胞计数,连续1－2周, 以培养时间为横轴,细胞数为纵轴（对数）, 生长曲线上细胞数量增加1倍时间为细胞倍增时间 * * 2021/3/13 * 3.2.1 贴壁细胞传代步骤 吸除瓶内旧培养液;加入1ml消化液;37C或室温25 C消化2 ~ 5分钟 显微镜下进行观察,发现胞质回缩、细胞间隙增大后; 直接加少许含血清的培养液,终止消化; 细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液计数,分别接种在新的培养瓶内。 2021/3/13 * 3.2.2 悬浮细胞的传代 直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清洗掉1/2 ~ 1/3,然后用吸管吹打形成细胞悬液后,再传代。 离心法:离心800 ~ 1000rpm,5min,除上清,加新的培养液,然后传代接种。 部分贴壁生长细胞直接吹打传代或需消化后传代 2021/3/13 * 3.3