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医学细胞生物学 第一章 绪论 Ⅰ细胞生物学发展的几个阶段中的重要事件 第一阶段：细胞的发现和细胞学说的创立 ① 英国，罗伯特·胡克 Robert Hook，1665 年首次观察到死细胞 “木栓” ②荷兰，列文虎克 A.V.Leeuwenhoek，1674 年首次观察到活细胞 Schleiden MJ.（德）施莱登和 Schwann T.（德）施旺， 1838-1839 年提出细胞学说 ④（德）魏尔啸 R. C. Virchow ，1855 年完善细胞学说 第二阶段：光学显微镜下的细胞学研究 (细胞学的经典时期） 第三阶段：实验细胞学阶段 第四阶段：亚显微结构与分子水平的细胞生物学 Ⅱ细胞的发现、细胞学说 细胞学说： ①一切生物都是由细胞组成的。②所有细胞都具有共同的基本结构。③生物体通过细胞活动反映其生命特征。④细胞来自原有细胞的分裂。Ⅲ细胞生物学的研究对象、研究水平、研究内容 1、概念：从细胞的显微、亚显微和分子三个水平对细胞的各种生命 活动开展研究的科学。 2、研究对象：细胞（人体细胞） 3、研究手段： ①显微水平 ----光学显微镜技术 ②亚显微水平 ----电子显微镜技术 ③分子水平 ----生物物理学方法及分子生物学技术 注：光镜下可观察到的细胞器：线粒体、中心体、高尔基复合体核：染色体、核仁 第二章 细胞生物学的研究方法 Ⅰ如何提高显微镜的分辨率 Ⅱ熟悉各类光学显微镜的特点 1、荧光显微镜（可见光） :暗背景，强反差，彩色图像定性、定位和定量的研究组织内的荧光标记物质。对活细胞内分子的动态变化进行实时观察。 2、相差显微镜通常用于观察活细胞：利用光的衍射和干涉把光程差 变成振幅差。（光的波长决定可见光的色彩，振幅决定亮度） 3、暗视野显微镜通过散射光成像（活细胞） 4、显微电影摄影技术记录细胞或细胞器的运动过程 5、共聚焦激光扫描显微境可以提供高清晰的彩色三维影像 （活细 胞）：结构①单色光源②共聚焦③逐点扫描 Ⅲ光镜与电镜的区别 显微 分辨 光源 透镜 真空 镜 率 LM 200n 可见光（ 400- 玻璃透 不要求 m 700nm ） 镜 真空 紫外光 100n （ 200nm) m 电子束 TEM （ 0.01-0.9nm ） 电磁透 要求真 0.1nm 镜 空  成像原理 利用样品对光的 吸收形成明暗反 差和颜色变化 利用样品对电子 的散射和透射形 成明暗反差 Ⅳ细胞分离和细胞培养的相关概念 ⒈细胞分离操作的原则：①等渗②低温（抑制溶酶体酶活性）③无菌 操作 ⒉细胞分离方法：①离心方法（细胞的密度特性）②流式细胞术（用 带有荧光的特异性抗体标记分离的细胞） ③免疫磁珠法④激光捕获显 微切割技术 3、细胞培养： ⑴细胞培养 (cell culture)：从机体中取出组织或细胞， 模拟体内的生理 环境，使之能够继续生存、生长和增殖的一种方法。 ⑵条件 ①营养条件：培养基： RPMI-1640 、DMEM 。 血清。 5%CO2 ③无菌环境 ⑶细胞培养的主要方式是原代培养和传代培养 ①原代培养（ primary culture）：直接从体内获取的组织和细胞进行的首次培养。 ②传代培养 （secondary culture）：原代培养的细胞经过增殖达到一定 密度后，将细胞分散， 从一个培养器以一定比例移到另一个或几个容 器中的扩大培养。 ⑷来源于体内的细胞可在体外建系（细胞系） ①细胞系（ cell line）：来源于恶性肿瘤组织的细胞或在培养过程中发生转化的变异细胞，这种细胞可以无限繁殖、传代。 ②细胞株（ cell strain）：用细胞克隆化的方法进一步改善细胞系的均一性，即分离出单个细胞使之增殖形成的细胞群。Ⅴ差速离心分离细胞组分，各组分的沉降顺序①方法：从低速到高速逐级沉降。 ②分离对象：体积、质量差别较大的颗粒 。（颗粒沉降速度与其直 径成正比） ③沉降顺序：细胞核 —— 线粒体（混有少量溶酶体与过氧化物酶体） —— 微粒体（主要是内质网，少量高尔基体） —— 核糖体。 第三章 细胞的概念与分子基础 Ⅰ细胞概念的理解 细胞是构成有机体的基本单位。 细胞具有独立完整的代谢体系，是代谢与功能的基本单位。 细胞是有机体生长与发育的基础。 细胞是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性。 没有细胞就没有完整的生命。Ⅱ真核细胞膜相结构与非膜相结构 Ⅲ常见细胞的体积，细胞体积守恒定律 ⑴细胞大小变异范围： 人与动物 10—100μm, 大多数细胞直径在 10~20μm 人体最大的细胞：卵细胞，直径 100μm 人体最小的细胞；小淋巴细胞，直径 4—5μm 生物界最大的细胞：鸵鸟卵细胞，直径达 12cm 生物界最小的细胞：支原体细胞，直径 0.lμm ⑵细胞体积的守恒定律 ：各类细胞体积都相当恒定，生物体器官