早期宫颈癌中出芽现象与肿瘤复发的相关性及分子机制研究.docxVIP

早期宫颈癌中出芽现象与肿瘤复发的相关性及分子机制研究 第一部分肿瘤出芽预测早期宫颈癌复发目的明确肿瘤出芽在早 期宫颈癌术后复发风险预测中的作用。方法回顾性分析 2008 年 1 月 至 2014年 12 月我院根治性手术治疗的早期宫颈癌 (FIGOⅠA2-ⅡA期), 复查 HE切片 , 统计包括肿瘤出芽在内的临床病理参数 ; 出芽定义为肿 瘤浸润性最前端出现的单个肿瘤细胞或不超过 5 个细胞的小瘤巢 , 选 取出芽密集区于 20 倍物镜 ( 奥林巴斯 BX51,视野面积 0.95mm2)下计数。 Wilcoxon 秩和检验分析肿瘤出芽个数与宫颈癌侵袭性表型间的相关 性。受试者工作特征 (receiver operating characteristics,ROC) 曲线检验肿瘤出芽个数对早期宫颈癌术后复发的预测价值 , 并选取临 界值将研究人群分为低级别出芽 (Low-grade tumor budding,LTB) 组 及高级别出芽 (High-grade tumor budding,HTB) 组。多因素 Logistic 回归分析影响早期宫颈癌盆腔淋巴结转移的独立危险因素 ;Cox 比例 风险回归模型分析影响早期宫颈癌复发和死亡的独立危险因素。 Kaplan-Meier 法绘制 LTB组及 HTB组无瘤时间生存曲线 ,Log-rank 检 验比较两组间复发风险差异。 联合 HTB及经典复发危险因素建立新的 复发预测模型 ,Log-rank 检验及 ROC分析检验新建模型的预测效能。 结果 1. 最终入选早期宫颈癌 643 例。 2. 早期宫颈癌中肿瘤出芽个数 与肿瘤分化程度 (P=0.008) 、FIGO分期 (P =0.004) 、肿瘤大小 (P=0.002) 、间质浸润深度 (P= 0.022) 、血管淋巴管间隙浸润 (Plt;0.001) 及盆腔淋巴结转移 (Plt;0.001) 显著正相关。 3.HTB 是盆腔淋巴结转移 (OR = 2.632,P=0.01) 的独立危险因素 ; 同时也是早期 宫颈癌患者术后复发 (HR = 4.711;950%CI:3.051-7.275;Plt;0.001) 及死亡 (HR= 2.880,P = 0.001) 的独立危险因素。 4.HTB 联合经典复发危险因子共建立了 9 个新的复发预测模型 ( 称为 Model 1-9), 其中Mode15采用 HTB、肿瘤最大径≥ 4cm、浸润宫颈间质外 1/3 层以及淋巴管血管间隙浸润四项作为中危因子且定义满足任意两项为复发中 危人群 , 其预测能力最强 (ROC曲线 AUC = 0.752); 与经典模型相比 , 此包含四项中危因素的新模型不仅 AUC值更大 (0.752 vs 0.667), 且 敏感性 (0.730 vs 0.656) 及特异性 (0.769 vs 0.679) 均得以提升。结 1. 肿瘤出芽与宫颈癌高侵袭表型相关。 2.HTB 是早期宫颈癌术后复发及死亡的独立危险因素。 3.HTB、肿瘤最大径≥ 4cm、浸润宫颈间质外 1/3 层以及淋巴管血管间隙浸润组成的包含四个中危因素的新模 型能精准地筛选复发危险人群 , 指导临床早期宫颈癌根治术后辅助治疗。第二部分 SATB1经上皮间质转化促使宫颈癌肿瘤出芽的研究目的 研究  SATB1对宫颈癌肿瘤出芽的影响并探讨相关机制。方法  1. 选取 2008 年  1 月至  2012 年  12 月根治性手术治疗的  FIGO IB1 期宫颈癌组 织制作组织芯片。免疫组织化学染色检测早期宫颈癌组织中  SATB1表 , 分析 SATB1表达水平与肿瘤出芽个数间的相关性及其对预后的影响。2. 短发夹 RNA(shRNA)下调宫颈癌细胞株 SATB1表达 , 建立稳转细胞株。EdU法检测宫颈癌细胞株增殖活性改变 ;Transwell 实验检测宫颈癌细胞株侵袭及迁移能力改变。 3. 下调 SATB1后:TagMan 探针实时荧光定量法及 Western blot 检测经典上皮间质转化 (EMT)相关因子的 mRNA水平变化及蛋白水平变化 ; 罗丹明标记的鬼笔环肽染色检测细胞 骨架蛋白改变。 4. 免疫组织化学染色检测宫颈癌组织中 EMT标志性因 E-cadherin 的表达 ,Spearman’s rank 相关分析检测 E-cadherin 表达水平与 SATB1表达水平间的相关性。 5. 建立裸鼠皮下移植瘤模型 ; 分析 SATB1下调后对裸鼠皮下瘤体积、肿瘤出芽及侵袭能力的影响 ; 免疫组织化学染色检测 SATB1下调后皮下瘤组织中 E-cadherin 、 Vimentin  及  Ki-67  的表达水平变化。结果  1.200  例