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电生理膜片钳技术教学中的一些心得 电生理学是生理学的一个分支， 是一门研究生物细胞或组织 的电学特性的科学。 主要研究对象包括细胞膜电势变化、 离子通 道的性状、 跨膜电流的调节以及可兴奋性细胞的动作电位等。 电 生理学研究中，主要利用物理学的研究方法来探讨生物学问题， 最核心的手段就是用膜片钳放大器进行生物电信号的检测。 这是 一类比较“专家向”的设备， 因此必须开设专门的课程对学生进 行深入的膜片钳相关技术的教学，使其在科研过程中少走弯路， 顺利的开展工作。 膜片钳技术属于物理学和生物学的交叉学科，教学难度较 大，在实际教学过程中需要注意一些与传统生命科学课程不同的 问题。 合理融会多种相关教材 目前在我国发行的膜片钳技术相关教材主要有康华光版、 陈 军版、刘振伟版三种，各有其不同的侧重点，但都不是非常适合 用于膜片钳技术教学课程。 康华光版教材侧重于对膜片钳硬件结 构的解析， 更多的是对膜片钳电路原理方面的描述， 比较少地对 具体实验内容给出指导， 学生容易对诸多的电学原理产生抵触情 绪；陈军版教材侧重于生命科学实验教学， 比较少涉猎放大器工 作原理类内容， 也不利于学生对膜片钳技术的深刻理解； 刘振伟 版教材对硬件相关原理和生命科学实验相关都有比较深入的探 讨，但是内容较为繁杂，学生比较难于把握，并且其中掺杂大量 类似于 Axon 公司产品说明书翻译的内容，并不适合所有用户。 笔者认为， 在实际教学中， 可以用陈军版或刘振伟版中宏观的与 生命科学具体实验相关的内容为蓝本， 添加对实际工作有比较大 促进作用的仪器相关知识，如：如何选择合适的反馈电阻、如何 排除外界干扰信号等。 而对于一些针对特别具体实验的内容， 如 怎样制备大鼠脑片、 怎样进行海马脑片记录、 怎样在新生大鼠离 体脑干――脊髓标本上进行实验等， 则不必列入课程范围内， 因 为在学生可以查找到的文献中有更新、 更完备、 更切合实际工作 的方法， 不需要在课堂上进行这些内容的训练。 我们课程的宗旨 是让学生理解膜片钳系统的工作原理， 并指导其将具体实验与放 大器原理结合起来进行科研工作， 而非手把手地进行实验方法教 学，何况这些教科书上的实验方法很容易被时间所淘汰。 至于教 材中关于如何连接数模转换线路、 如何使用某一种采集软件的内 容，也不必列为教学内容。 因为这些都是在仪器说明书中所包含 的内容， 并且随着设备的更新换代会有所改变， 学生可以通过阅 读说明书来获得更准确的信息。 针对学生的特点因材施教 进行膜片钳技术学习的学生绝大多数为理科背景主修生命 科学或者医科背景主修医学方面的学生。 这些学生的工科知识很 薄弱，比较难于理解膜片钳放大器系统是如何进行工作的。 因此 在教学过程中，不必强求其理解放大器的工作原理，如：膜片钳 放大器是如何降低噪声？为什么要采用多阶低通滤波？这些问 题比较枯燥， 没有接触过电学方面课程的学生容易失去兴趣， 只 需要他们掌握大致的概念即可， 即为什么要滤波， 低通滤波的优 点和缺点是什么， 并用滤波前后的具体数据进行比较。 再有比如 噪声的分类方式及其计算公式， 不必过分深入， 只需要学生掌握 可以降低噪声的手段即可， 如在电极尖端涂覆树脂、 减少内液使 用量等。但有必要对他们强化跟电生理学测量相关的放大器方面 知识，如： P/N 漏减( P/N leak substraction )这个知识点， 就不可这样一带而过，而是需要明确 P/N 漏减功能是怎样实现 的？为什么要进行 P/N 漏减操作？这里需要注意的是， 要采用更 合适理科背景学生理解的方式进行教学。 如果参照传统课本中的 模式，先提出 P/N 漏减的概念，再给出计算方法，最后提出应用 范围，往往收不到良好的效果， 因为学生已经陷入繁杂的理论体 系中。 这时应该改换一种模式， 首先拿出尚未进行 P/N 漏减的膜 片钳数据如钠离子电流数据和标准的文献中的做比较， 再告诉学 生，产生这样数据差距的原因， 主要是因为线性被动反应电流导 致也就是通常所说的漏电流导致的。 接下来对 P/N 漏减模式进行 详细解释： 给出细胞电生理等效模式图， 指出当细胞膜内外电压 差发生变化时， 细胞作为电路中的等效电阻电容并联体系， 其电 阻会有电流通过， 电容会有充放电反应， 也就是产生了电阻电流 和电容电流， 对于这种电流干扰， 是不能简单地通过平移曲线来 消除其影响，因此需要引入P/N漏减的方法，在向细胞给出幅度 为?d阶跃刺激获得实验所需电流数据之前，向细胞施加 n个阶 跃电压， 其电压为 ?d/n ，这些较小的阶跃电压可以选择与阶跃刺 激方向相同， 也可以选择相反， 这样将这些阶跃电压所得的被动 反应电流加和就可以得到在幅度为 ?d阶跃时候会产生的漏电流， 通过曲线间加减法即可消