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病理制片中固定液的选择 由于病理学诊断是诊断的金标准， 是辅助临床诊断的主要把 关口，也是最后的宣判性诊断。做好病理诊断，层层步骤就显得 尤为重要，包括组织的取材，固定，脱水，浸蜡，包埋及染色。 组织的固定是一个关键的过程， 因为没有好的固定就没有好的制 片，没有好的制片就不会有好的成品， 一张好的切片与固定有着 密切的关系。 固定的目的 固定的概念是将采取的活体组织置于化学性溶媒 （固定液 ） 中，使其不发生自溶与腐败，保持被采取时的形态。 固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的 成分和形态，迅速防止组织、 细胞的死后变化， 防止自溶与腐败， 使细胞内的蛋白质、 脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质， 使组织中的各种物质沉淀和凝固起来， 而产生不同的折射率， 造 成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。因此，固定的组 织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液。其固定液的 量一般小于组织块总体积的 4 倍以上。 固定液的选择 固定液必需要有较强的渗透能力，能迅速地渗入组织内部， 不会使组织过度收缩或膨胀， 并且能使组织内易观察的成分可以 凝固为不溶性物质， 能使组织达到一定的硬度， 获得较佳的折光 率和对染料具有较强的亲和力。 组织细胞中不至于因固定引起人 为的改变， 因为在凝固原生质以后， 增加了细胞对于各种穿透的 抵抗力， 不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形， 并尽可 能地避免使组织膨胀或收缩， 使细胞内的成分 （蛋白质 ）凝固沉淀 下来，由正常的半液体状 （ 胶体）变为半固体状 （凝胶） ，增加媒染 作用和染色能力， 使组织能够得到充分的固定， 便于以后的蜡块 保存。 固定液的种类很多， 分为单纯固定液和混合固定液， 其中混 合固定液比较常用。 2.1 常用单纯固定液 2.1.1 甲醛 （formaldehyde） 为非沉淀性固定剂，是一种约有 40％重量溶于水的气体，易挥发，市售的为 40％的甲醛水溶液， 也称为福尔马林液 （formalin） 。此液久存自行分解， 形成白色沉 淀为副醛 （三聚甲醛或多聚甲醛 ） 。用于组织固定的浓度为 10％， 实际浓度含甲醛为 4％。其固定液渗透能力很强，固定均匀，对 组织收缩小，故而对于免疫组织化学标本的制作常用此液。 2.1.2 乙醇 （alcoh01） 即乙醇，为还原剂，无色液体，可与 水无限相溶，固定兼脱水，用于固定的浓度为 80％－ 95％。用 于糖原、纤维蛋白及弹性纤维的固定，乙醇的渗透力较甲醛弱， 能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白。缺点为渗透能力相对较弱，且 易挥发和吸收空气中的水分， 故而使用时应盖好容器； 并对色素 有破坏。 2.1.3 醋酸 （aceticacid） 又名乙酸，为带有刺激气味的无色 液体，低于15C为冰醋酸，可溶于水，能沉淀核蛋白，可较好 地保持染色体结构， 把未分裂细胞核的染色质沉淀为块状体， 从 而更清楚地显示细胞核结构。 5％的醋酸 pH 2－8，可抑制细菌 和酶的活性，可防止自溶，缺点为组织膨胀较明显，对于胶原纤 维与纤维蛋白尤其明显。一般很少单独使用。 2.2 常用混合固定液 2.2.1 AF 液（乙醇+甲醛液 ）配方： 95％乙醇或无水乙醇 90ml+40%甲醛10ml。此液不但有甲醛的固定作用，并兼有脱水 作用，用于固定肥大细胞和糖原，效果较好，米粒大小的胃镜等 标本需要4 — 6h,其余外检的大块组织需用 12 - 24h，其优点是 固定后可不经水洗，直接放人 95％E, 醇继续脱水，大大减少了 脱水的过程和缩短了脱水时间，增加了工作效率。 222 AAF液（醋酸+乙醇+甲醛液）配方：95% E,醇或无水乙 醇85 ml+醋酸5 ml+甲醛液10 ml。此液对染色质固定较好，由 于醋酸能使组织膨胀， 因此可抵偿因乙醇、 甲醛等固定液引起的 组织收缩和硬化，故常作为混合液而使用。 AAF固定液的缺点是 组织固定后对细胞膜上的蛋白质和细胞内的某些结构有一定的 破坏作用，而对免疫组织化学染色有一定的影响。 2.2.3甲醛—生理盐水配方：甲醛液 10 ml+生理盐水90 ml。 应用较广泛，pH为乙此液可用于保护脂类和细胞核。送检组织 标本在手术切下或活检离体后， 细胞结构发生变化， 为保持细胞 与生活时的形态相似， 必需迅速渗入组织来固定原生质。 如果当 时没有合适的固定液， 可以浸泡在生理盐水中保存。 此液可保护 类脂与细胞核，在酸性染色（如V-G染色）或三重染色之前可做二 次固定。 小结 由于醇类对低分子蛋白质、 多肽及胞质内蛋白质的保存效果 较差，解决的方法是与其他试剂混合使用， 例如加冰醋酸、 乙醇、 氯仿、甲醛等。在病理检验中，现在很少单独使用醛类、醇类等 作为组织固定液，多数为混合固定液。根据以上比较，