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HPLC 法测定发芽糙米中 γ―氨基丁酸含量试验 摘要：建立测定 γ-氨基丁酸的高效液相色谱分析方 法，测定不同蒸煮发芽糙米中的 γ -氨基丁酸含量。 试验结果表明：与未蒸煮相比，蒸煮 20 min 的发芽糙米中的 γ -氨基丁酸含量最高，增加率为 66.30%。 关键词：高效液相色谱； γ-氨基丁酸；发芽糙米；检测 波长 中图分类号： S511 文献标识码： A 文章编号： 1674-1161 2017）03-0050-02 发芽糙米是将糙米发芽至一定芽长得到的芽体，相当于 将糙米活化，其芽体具有旺盛的生命活力。发芽后的糙米不 仅品质有所提升，而且含有多种生物活性物质，如植酸、 γ -氨基丁酸、 γ-谷维素等。 γ-氨基丁酸又名氨酪酸，具有改 善神经机能、增强肝功能、防止动脉硬化、调节肾功能、预 防肥胖等多种生理活性能。 利用高效液相色谱建立 γ -氨基丁 酸快速分析方法，完成色谱条件的优化并对不同蒸煮时间发 芽糙米中 γ-氨基丁酸的含量进行测定。 材料与方法 1.1 仪器与设备 Agilent 1260 高效液相色谱仪； AR224CN 型分析天平： 奥豪斯仪器（上海）有限公司； pHS-3CW 型 pH 计：上海般 特仪器制造有限公司； SL-250A 高速多功能粉碎机：浙江省 永康市松青五金厂； TDL-5-A 低速台式大容量离心机：上海 安亭有限公司。 1.2 液相色谱工作条件 色谱柱： Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 （ 250 mm× 4.6 mm×5 μ m）；流动相 B ：纯乙腈；流动相 D：浓度为 0.025 mol/L ， pH 为 5.90±0.05 的乙酸钠溶液；紫外检测器： 发射波长 332 nm；柱温： 40 0.5 mL/min ；梯度洗脱程序如表  ℃；进样量： 1 所示。  10 μL ；流速： 1.3 标准曲线绘制 配制浓度分别为 20， 40，60， 80，100 mg/L 的γ -氨基 丁酸标准溶液。依次取上述溶液 1 mL ，加入 1 mL 的邻苯二 甲醛衍生试剂，充分混匀，衍生反应 2 min 后过滤，依次测 定并绘制标准曲线。 1.4 样品溶液制备 精确称取 3 g 制备好的发芽糙米粉，溶于 50 mL 浓度为 60%的乙醇中，在 50 ℃水浴振荡 1 h，再以 3 000 r/min 的速度离心 15 min ，取上清液用 0.45 μ m 膜过滤，备用。 结果与分析 2.1 色谱条件的优化 为提高分析灵敏度，吸收波长选择是关键。利用紫外分 光光度计对标准溶液进行扫描，得到最大吸收波长为 332 nm。 2.2 标准曲线的绘制 在选定的色谱分析条件下对  1.3 中的系列标准溶液进行 HPLC  分析，每个质量浓度水平重复进样  3 次。以各化合物 的峰面积（  y）为纵坐标、对应质量浓度（  x，mL/min  ）为横 坐标绘制标准曲线， 得线性方程及相关系数。 γ- 氨基丁酸标 准溶液在  35 min  内实现基线分离，见图  1。 γ-氨基丁酸的标准曲线方程为：  y=22.888x+25.29  ，相 关系数  R2=0.999 8 。 γ -氨基丁酸的量在  20～100 mg/L  之间 时，呈良好的线性关系。 2.3 发芽糙米中 γ-氨基丁酸的测定 分别对煮制时间为 20 ， 40，60， 80 min 的烘干发芽糙 米中所含有的 γ -氨基丁酸进行测定，其结果见图 2。 从测定结果看，与未蒸煮相比，蒸煮后的发芽糙米中的 γ-氨基丁酸都有所增加。蒸煮时间为 20 min 时γ -氨基丁酸 增加 66.30% ；40 min 时增加 48.19%；60 min 时增加 41.38%； 80 min 时增加 18.07%。 在蒸煮过程中， 随着蒸煮时间的增加， 部分 γ -氨基丁酸会随水蒸气流失， 所以随着蒸煮时间的增加， γ- 氨基丁酸的含量呈逐渐下降趋势。 结论 以邻苯二甲醛为衍生剂，采用高效液相色谱法对不同蒸 煮时间的发芽糙米中 γ -氨基丁酸含量进行测定， 优化色谱条 件并建立分析方法：经 ZORBAX Eclipse Plus C18 （250 mm 4.6 mm× 5 μ m）色谱柱分离，乙腈 -乙酸钠溶液为流动相梯度洗脱，流速 0.5 mL/min ，紫外检测器波长为 332 nm。发芽糙米中所 含有的 γ -氨基丁酸都有所增加，蒸煮 20 min 的发芽糙米中 -氨基丁酸含量最高，增加 66.30% 。参考文献 徐冉，薛雅琳 .米糠油中 γ -谷维素分析检测技术研究现状 [J]. 中国油脂， 2014， 39（ 4）： 96-99. 蒋维维， 易金娥， 谭柱良 .γ -谷维素的