HPLC法测定复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷的含量.docxVIP

HPLC 法测定复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷的含量 [ 摘 要] 目的：测定复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷含量。 方法：采用 HPLC 法，以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂， 流动相为乙腈 -0.2% 磷酸（ 15∶ 75），检测波长为 256nm，流速为 1.0ml/min 。结果：金丝桃苷进样量在 3.56～ 71.2μg/ml 范围内与峰面积具有良好的线性关系（ r=0.999 ）；平均加样 回收率为 98.93%，RSD=1.98% （n=6）。结论：该方法稳定、准确，可用于复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷含量测定。 [ 关键词 ] 复方罗布麻片Ⅰ；金丝桃苷；高效液相色谱法 [ 中图分类号 ]R284.1 [ 文献标志码 ] A [ 文章编 号]1007-8517 （ 2015） 06-0014-02 复方罗布麻片Ⅰ收载于《化学药品地方标准上升国家标 准（第十一册） 》，由罗布麻叶、野菊花、防己、硫酸双肼嗪 等组成，为中西药复方制剂。方中罗布麻叶具有平肝安神、 清热利水之功，对本方发挥临床疗效有重要作用。原标准中 未对罗布麻叶进行质量控制。现代药理研究表明，罗布麻叶 降血压、降血脂主要活性成分为黄酮类化合物，其中以金丝 桃苷含量最高 [1] 。为有效控制复方罗布麻片Ⅰ的质量，促进 临床用药安全，本试验建立了以反相高效液相色谱法测定复 方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷含量的方法。 仪器与试药 1.1 仪器 岛津 LC-2010A 高效液相色谱仪； AE-240 型 电子天平（瑞士 Mettler Toledo 公司）。 1.2 试药 金丝桃苷对照品（批号： 111521-200303，中 国药品生物制品检定所） ；复方罗布麻片Ⅰ（批号： 120802， 山西津华晖星制药有限公司；批号： 0130201，山西云鹏制 药有限公司；批号： 121202，山西亨瑞达制药有限公司） ； 甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱： Kromasil C18 （250 × 4.6mm， 5μ m）；流动相：乙腈 -0.2% 磷酸（ 15∶75）；柱温： 30℃； 流速： 1.0ml/min ；检测波长： 256nm。在此色谱条件下，供 试品色谱图中，以金丝桃苷峰计算，理论板数为 10126。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取金丝桃苷对照品适量， 加甲醇溶解，制成 30μg/ml 的溶液，作为对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取复方罗布麻片Ⅰ适量，研细， 精密称取约 3g，至锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 20ml ，密 塞，称定重量，加热回流 30min ，放冷，称定重量，用 50% 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工艺， 配制 不含罗布麻叶的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制成阴 性对照溶液。 2.5 系统适用性实验 精密吸取供试品溶液、 对照品溶液 和阴性对照溶液各 10μl ，按照上述色谱条件测定，结果表明阴性对照溶液在对照品溶液的相同保留时间处无杂质峰干扰。对照品色谱图、供试品色谱图、阴性对照色谱图见图1～ 3。 2.6 线性关系 精密吸取对照品溶液 （浓度 μ g/ml ）1、5、 10、15、20μl，依法进样，以峰面积积分值为横坐标，对照 品进样量为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为： C=4× 10-7A-0.0234 ， r=0.999 。试验结果表明，金丝桃苷在 3.56～ 71.2μ g 范围内呈良好的线性关系。 2.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液 10μ l，分别 于 0、 3、 6、9、 18h 注入液相色谱仪，测得待测成分峰面积 积分值的 RSD 为 2.02%，结果表明供试品溶液在 18h 内基本 稳定。 2.8 精密度实验 精密吸取金丝桃苷对照品溶液 10μ l， 重复进样 6 次，计算得峰面积积分值的 RSD 为 1.82% ，表明 本法精密度良好。 2.9 重复性试验 精密称取同一样品（批号： 121202）6 份，按样品测定法测定，结果每 g 含金丝桃苷分别为 0.36、 0.35、0.36、0.34、0.36、0.35mg（ RSD=2.3% ， n=6），表明 本法重现性良好。 2.10 加样回收率试验 取复方罗布麻片Ⅰ（批号： 121202，金丝桃苷含量为 0.35mg/g ）6 份，精密称定，分别 精密加入一定量的金丝桃苷对照品（ 35.6μ g/ml ），照供试品 测定方法进样测定，计算回收率。结果表明，本方法具有较 好的准确度。见表  1。 2.11 样品的含量测定  取复方罗布麻片Ⅰ按“  2.3”项下 方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，进样  10μ l  记 录色谱图峰