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流式常用试剂配制 ———————————————————————————————— 作者 : ———————————————————————————————— 日期： ? 一、流式细胞术常用试剂 ? １、 1０％ N ａ N3：将１ 0gNaＮ３溶解于 100ml 蒸馏水中 ,室温保存；活体实验或在辣根过氧 化酶反应中可不使用 NaN 3。 ?2、3%BSA ／PBS:１ 00ml PBS 中加入３ g B Ｓ A ，使之溶解， 再加入 0.２ mｌ 10%的 NaN 3。 ? 3、5００ mmol／Ｌ EＤＴＡ :将 186g ED Ｔ A?Na2?2H2O 溶解于 40０ ml 蒸馏水中 ,用 NaＯＨ 将 PＨ调至 8.０，补充蒸馏水至 500ｍｌ ,分装 ,高压灭菌 ,室温保存。 4??、 4%多聚甲醛 :在磁 力搅拌下，将 4g 多聚甲醛溶于 100ml PBS，加入数滴Ｎａ OH, 在通风柜中于 60 度加热， 使其溶解，调整 PH 至 7.4,使用前新鲜配制。 ?5、消化液 :0．２ 5%胰蛋白酶（用培养液或Ｐ BS 配制 )或 0.25%胰蛋白酶与 0.02％ EDT Ａ 的混合液。 6??、红细胞裂解液 :NH 4Cl 4．１ 6g,KH ＣＯ 3 0.5ｇ ,EDTA?2N ａ 0． 02g，溶于 10０ ml 水中，调 PH 至 7.2，补充蒸馏水至 500ml ，4 度储存，使用时需恢复至室温。 ? 7、流式细胞抗体稀释剂： 0.1mmol/L PBS 液（Ｐ H 7.4)+ １ %BSA ＋ 0.1％ Na N 。 2 ３ ?8、常用细胞破膜剂： PBS 液 (PH 7.4)＋ 1%FB Ｓ（或Ｂ SA)+0 ．１％Ｎａ N3 +0． 1％ sapoｎ i ｎ(Si ｇｍ a 的效果不错 )。 9??、流式细胞染色洗涤液 :含 2%的 B ＳA 、 0.１％Ｎ aN3 的 PＢＳ （PH 7.４ )。 ?1０、PＩ染液 (保存液，10×,用于细胞周期和凋亡检测 ):10m ｇ PI 溶于 10ml PBS，加入 2mg 无 D ＮＡ酶的 RＮA 酶， 4 度保存备用。应用时， 10 倍稀释，每管加０ .３ ml~ ０ .5ml ＰI 染液。 ?1１、 Hanks 液的配制（ＢＳ S,主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液 ,不能单独作为细胞、 组织培养液 )?原液 A?ＮaCl 1６０ g?MgSO ４ ?７Ｈ 2Ｏ 2g KC ｌ 8ｇ?MgCl?6H 2O 2g ＣaCl2 2．８ｇ ?溶于１ 00０ml 双蒸水 ?原液 B1?)Na 2Ｈ PO4?1２H 2O 3.0４ g KH PO 1.2ｇ ?葡萄糖 2０． 0ｇ 2 4 溶于 800ｍｌ双蒸水 2）0.4％酚红溶液 :取酚红 0．４g 置玻璃研钵中 ,逐滴加入 0.1Ｎ NaOH 并研磨 ,直至完全溶解 , 约加入 0.1N Ｎ aOH 10m ｌ。将溶解的酚红吸入１ 00ｍ l 量瓶中 ,用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中 ,最后补加双蒸水至 100ｍ l 。 将 1）液和 2) 液混合 ,补加双蒸水至 1000ｍｌ即为原液 B 。应用液： ?原液 A １份 原液 B 1 份?双蒸水 18 份 混合后， 分装于２ 00ｍ l 小瓶中， 高压灭菌。 临用前用无菌的５ 7.6。 12??、磷酸盐缓冲液的配制（ＰＢ )  .６ %NaHC Ｏ 3 调  PH  至 7.2～ A 液 (0.2mｏｌ／  L N ａＨ 2PO4 水溶液  ): aH ２PO4?Ｈ 2Ｏ 27.6g，溶于蒸馏水中 ,稀释至 10０ 0mｌ。 B 液（ 0.2mol/ Ｌ Na ＨＰ O 水溶液） : 2 4 Na2ＨＰＯ 4?7Ｈ 2O ５ 3.6g 加蒸馏水溶解 ,加水至１ 000ｍｌ。 不同 PＨ值Ｐ B 的配制： A 液ｘ ml（参照下表 )中 ,加入Ｂ液ｙ ml ，为 0.2m ｏｌ /L 的 PB。若再加蒸馏水至 20０ mｌ , 则成 0.１ mｏｌ／Ｌ PＢ。 PＨ x/ml y/ml 5． 7 93．5 6.55?.８ 92．０ 8.05?.９ ９0． 0 １０． 012 87.7 6.0?． 3 6.１ ８ 5.0 １５ .0 ６． 2 8１.５ 1８． 577.5 6.3? ２ 2.5 6.4 7３ .５ ２ 6.５ 6． 5 68.５ 3１ .5?６ .6 62.5 37． 5?６． 7 ５6.5 ４3．5 6.８ 5１ .0 49.06?.９ ４5.0 ５ 5.0 7.0 3９ .0 61． 07?.１ 3３ .0 6７.０ .２ 2８ .0 ７