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高二生物基因工程;考纲要求展示;知识网络构建;一、基因工程 1. 概念及基本工具 概念：按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过________和________等技术，赋予生物以新的________，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型或生物产品，又叫________技术。;高二生物基因工程;2. 基因工程的基本操作程序;高二生物基因工程;高二生物基因工程;高二生物基因工程;3. 基因工程的应用及成果 (1)植物基因工程的成果;(2)动物基因工程的成果;高二生物基因工程;二、蛋白质工程 目标：根据人们对蛋白质________的特定需求，对蛋白质的________进行分子设计。 原理：基因改造 基本途径：预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测应有_________序列→找到对应的________序列(基因);【自我校对】 一、1. 体外DNA重组 转基因 遗传特性 DNA重组 限制性核酸内切酶 某种特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 黏性末端 黏性末端 平末端 平末端 λ噬菌体的衍生物 2. PCR技术 引物 DNA聚合酶 指数 启动子 首端 RNA聚合酶 终止子 尾端 鉴别受体细胞中是否含有目的基因 农杆菌转化法 花粉管通道法 显微注射技术 DNA分子杂交技术 抗原—抗体杂交法 3. （1）Bt毒蛋白基因 蛋白酶抑制剂基因 病毒外壳蛋白抗毒素合成 渗透压调节 抗除草剂 （2）肠乳糖酶 乳腺蛋白基因的启动子 （3）正常基因 二、功能 结构 氨基酸 脱氧核苷酸;;限制性核酸内切酶与DNA连接酶的比较 ;1. 限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 2. DNA连接酶起作用时不需要模板。;导入的目的基因的表达需要调控序列，因此在插入目的基因的部位之前需有启动子，之后需有终止子。;【例1】　(2010·江苏高考·T27)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：;(1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma ??切割，原因是________________。 (4)与只使用Eco RⅠ相比较，使用Bam HⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基因培养，以完成目的基因表达的初步检测。;【解析】(1)质粒是双链环状DNA分子，在Sma Ⅰ切割前没有游离的磷酸基团，切割产生的DNA片段末端是平末端，因而质粒经切割后含有2个游离的磷酸基团。(2)质粒的热稳定性主要由氢键的数量决定；DNA分子中A与T之间存在2个氢键，C与G之间存在3个氢键，因此DNA分子中G—C碱基对越多，热稳定性越高。Sma Ⅰ识别CCCGGG序列，并在C和G之间将这段序列切开，也就是质粒中Sma Ⅰ酶切位点越多，G—C碱基对越多，热稳定性越高。(3)据图1可知，Sma Ⅰ切割的位点在抗生素抗性基因之中，据图2可知Sma Ⅰ切割的位点在目的基因之中，所以不能使用Sma Ⅰ切割。(4)用同种限制酶切割后的质粒和目的基因，在基因表达载体构建时，常形成三种连接方式，其中目的基因与目的基因的连接、质粒与质粒的连接是无效的连接，用两种限制酶可避免此类现象。(5)基因表达载体的构建过程中需加DNA连接酶，连接脱氧核糖和磷酸。(6)抗生素抗性基因属于标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。(7)因为蔗糖是唯一碳源，故无重组质粒的大肠杆菌突变体不能存活(饿死)。;【答案】(1)0、2　(2)高　(3)Sma Ⅰ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因　(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化　(5)DNA连接　(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞　(7)蔗糖为唯一含碳营养物质;1. 苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。 (