与胎儿心肌细胞共同培养诱导人胚胎干细胞发生心肌样分化.docVIP

与胎儿心肌细胞共同培养诱导人胚胎干细胞发生心肌样分化 作者：常静1,雷寒1,陈建斌2,贾锋鹏1 单位：重庆医科大学附属第一医院：1心血管内科,2血液内科， 重庆400016 提要：目的 了解与胎儿心肌细胞共同培养对人胚胎干细胞 (embryonic stem cells, ESCs)向心肌方向分化的影响。方法 通过酶消化法从流产胎儿中分离培养出胎儿心肌细胞及成纤维 细胞,将后者用丝裂霉素处理后制备成滋养层；收集辅助生育屮 心施行试管婴儿后所剩余的健康胚胎，取内细胞团接种在滋养层 上分离培养岀人ESCso用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridzation, FISH)方法來检测上述两种细胞的XY染色体，选 用不同性别的胎儿心肌细胞与2~5代人ESCs以1 ： 2的比例混合, 然后以5times; 104/cm2的密度接种于培养皿屮进行共同培养， 诱导其向心肌方向的分化。将未与胎儿心肌细胞混合的人ESCs 以相同密度接种于培养皿中作为阴性对照。至第5天收集共同培 养的细胞,进行双重染色，即FISH染色及心肌特异性蛋白Desmin 或cTnl免疫组化染色。结果 在与胎儿心肌细胞共同培养5 d 后，40% ~50%的人ESCs在心肌细胞的诱导下表达心肌特异性蛋 白Desmin或cTnl,而没有进行共同培养的人ESCs不表达上述蛋 白。结论 与胎儿心肌细胞