山药多糖对葡萄糖苷酶抑制实验设计汇编.docxVIP

山药多糖提取物对葡 萄糖苷酶的抑制实验 —?所需试剂 （1） PBS缓冲液 称取 8g NaC、0.2g KCl 1.44g N^HPQ和 0.24g KfPOk,溶于 800ml 蒸馏水中，用HCI调节溶液的pH值至6.8，最后加蒸馏水定容至1L 称取 NaCI 8g KCl 0.2g Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于 900ml 双蒸水中，用盐酸调pH值至6.8，加水定容至1L，常温保存备用。 实际配制500ML即可。 （2） 3 mmol/L谷胱甘肽溶液 谷胱甘肽分子量：307.32，称取46.1mg谷胱甘肽定容至50ml蒸馏水中，即 为3 mmol/L谷胱甘肽溶液。 （3） 0.01 mol/L PNPG 溶液 4-硝基苯-aD-吡喃葡萄糖苷分子量：301.25,称取150.6mg定容至50ml蒸馏水 水中，即为0.01 mol/L PNPG溶液。 （4） 0.2 mol/L Na?CO3 溶液 Na2CO3分子量：105.99,称取 2.12g 定容至 100ml，即为 0.2 mol/L NazCQ 溶液 一.实验流程 1】酶活性的测定 检测样配置 取67 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.8） 1.4 mL、 3 mmol/L谷胱甘肽溶液40卩L 0.01 mg/mL a-葡萄糖苷酶溶液60卩L 37 C保温10 min后， 加0.01 mol/L PNPG溶液100叮摇匀， 37 C保温继续反应10 min, 加入0.2 mol/L NazCQ溶液800卩L终止反应， 于400 nm波长处测定吸光值. 参比配置 取67 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.8） 1.4 mL、 3 mmol/L谷胱甘肽溶液40卩， 水60卩, 37 C保温10 min后， 加0.01 mol/L PNPG溶液100卩,摇匀， 37 C保温继续反应10 min, 加入0.2 mol/L NCQ溶液800卩L终止反应, 于400 nm波长处测定吸光值. 检测样吸光值为 参比吸光值为 2】多糖提取物抑制a-葡萄糖苷酶活性的测定 1.待测样配置 A 配置浓度为2 mg/mL的多糖酸性水提取物 分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 □，于10mL塑料试管中 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL 加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 0.01 mg/mL a-葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 °C 保温 10 min 加0.01 mol/L PNPG溶液100卩,摇匀 37 C保温继续反应10 min 加入0.2 mol/L NazCQ溶液0.8 mL终止反应 于波长400 nm处测定吸光值 B 配置浓度为2 mg/mL的多糖酸性氯化钠提取物 分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 □，于10mL塑料试管中 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL 加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 C 保温 10 min 力卩0.01 mol/L PNPG溶液100卩,摇匀 37 C保温继续反应10 min 加入0.2 mol/L NCQ溶液0.8 mL终止反应 于波长400 nm处测定吸光值 C 配置浓度为2 mg/mL的多糖中性水提取物 分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 □，于10mL塑料试管中 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL 加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 °C 保温 10 min 力卩0.01 mol/L PNPG溶液100 口,摇匀 37 C保温继续反应10 min 加入0.2 mol/L NazCQ溶液0.8 mL终止反应 于波长400 nm处测定吸光值 2.空白样配置 取水100 Z 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL 加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 ^L 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 C 保温 10 min 加0.01 mol/L PNPG溶液100卩,摇匀 37 C保温继续反应10 min 加入0.2 mol/L NCQ溶液0.8 mL终止反应 于波长400 nm处测定吸光值 空白样吸光度 3.参比配置、 分别取水20、40、60、80、100、150、200 □，于10mL塑料试管中 各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL 加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60卩, 37 °C 保温 10 min 力卩0.01 mol/L PNPG