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肾小管上皮细胞钙通道与尿路结石形成的相关性研究 摘 要 （限400字）: 尿石症的病因未明， 其发病率和复发率较咼， 防治措施令人不满意。 设想某种病理因素 使肾小管上皮细胞的钙通道部分或兀全失活，肾小管对钙的重吸收减少，导致尿钙的排出增 力口，可能为尿路结石形成的机制。本实验在既有钙通道与咼尿钙相关研究的基础上，进 步 研究钙通道与尿路结石形成的相关性。通过制备 Vit D缺乏实验动物模型，分别用免疫组化 技术及荧光探针钙图像技术观察实验模型钙通道表达、钙离子分布的变化与尿路结石形成的 关系；比较伴有高钙尿症的尿石症患者、无伴高钙尿症的尿石症患者及非尿石症患者肾小管 上皮细胞钙通道的表达差异，为寻找尿石症的病因提供实验依据；通过体外肾小管上皮细胞 （HEK293培养，用全细胞膜片钳技术观察钙通道兴奋剂与拮抗剂对肾小管上皮细胞膜钙离 r 亠 厶j-tn- =r 丄dYr-、亠m 厶 、了 .丄汀 一厶厶存亠、//、丄丄u亠/厂丄口 小.z_i亠丄口 子生物电的改变，寻找改变钙 关键词（用分号分幵， 最多5个） 通道活性的药物，为 帀y疋尿石症的防治措施提供依据。 钙离子通道；肾结石；肾小管上皮细胞 报告正文 （一）立项依据与研究内容 项目的立项依据 泌尿系结石是一个全球性的疾病，是我国最常见的泌尿外科疾病之一。由于当前 尿石症的确切病因仍不十分清楚，导致其发病率居高不下，治疗后复发率也很高，预 防措施并不令人满意。因此，对尿石症的病因研究具有重要的临床意义。 尿石症的的发病因素包括遗传、环境、饮食、疾病和代谢等多个方面。其发生的 机制历史上也经过长期的探索，提出了各式各样的学说。如肾乳头钙化斑学说，基质 模板上形成学说，结石首发于肾淋巴系统学说，尿液晶体胶体失衡学说及尿液的过饱 和结晶和抑制物学说等。这些学说只在结石形成的某一片段或某一方面阐述结石的形 成机制，而且部分机制还未得到全面、深入的研究。 钙代谢异常是近年研究较多的引起尿路结石的重要因素之一。钙是泌尿系结石成 分中最主要的阳离子，Dau do等对10617份泌尿系结石标本作红外光谱分析，发现 86% 的泌尿系结石含有草酸钙，80含有磷酸钙。文献统计至少40?50%尿路结石患者合并 高钙尿症。我们对8 4例复杂性肾结石标本进行结石化学成分分析，其中70例（83.3% 为含钙成分的混合结石；而且发现至少19.3%11/57）的小儿上尿路结石合并高钙尿症。 物理化学研究表明，尿液中的草酸钙和磷酸钙的饱和度与尿钙的浓度有关，尿钙增高 易于诱发或促进含钙尿路结石的形成。 高钙尿症的病理生理机制的研究，包括甲状旁腺素的作用、高钙饮食、骨代谢异 常、细胞因子的作用、遗传因素、钙通道或钙泵等方面。近年来人们对钙通道及钙的 机体代谢进行了深入的研究： 血清钙正常水平的维持依赖于肠道对钙的吸收、骨钙的释放、肾对钙的重吸收的 调节作用。正常情况下，体内并不存在骨钙的过度释放或沉积过程。体内钙环境的正 常维持实际上取决于肠道钙吸收和尿钙排泄的平衡关系。无论在肾脏和在肠道，钙可 通 过 被 动 滤 过 和 主 动 重 吸 收 两 种 途 径 进 入 细 胞 外 液 。 而 钙 的 主 动 重 吸 收 由 钙 调 激 素 包 括 1,25- 二 羟 维 生 素 D3 和 甲 状 旁 腺 素 （ PTH） 进 行 调 节 。 钙 的 主 动 吸 收 主 要 发 生 在 近 端 小 肠 与 肾 的 远 曲 小 管 （ DCT） 和 集 合 管 （ CNT）。 从 细 胞 水 平 看 , 钙 的 主 动 吸 收 过 程 分 为 三 个 步 骤 : 1、 钙 离 子 通 过 管 腔 膜 的 钙 通 道 （ TRP5V/ 6） 进 入 小 肠 或 肾 小 管 上 皮 细 胞 ； 2、 在 细 胞 内 ， 钙 离 子 与 钙 结 合 蛋 白 结 合 （ 包 括钙结合蛋白D28 I和/或D9K,弥散至基底膜侧；3、钙离子通过钠-钙交换（NCX 1） 和/或钙-ATP酶主动转运进入细胞间隙。管 腔膜的钙通道（TRPV 5/ 6）是 钙 主 动 吸 收 的 主 要 限 速 步 骤 ， 对 维 持 钙 的 体 内 平 衡 至 关 重 要 。 2004 年 12 月 ~2005年 12 月 ， 本 课 题 组 TOC \o 1-5 \h \z 进 行 《 二 羟 吡 啶 在 实 验 小 鼠 草 酸 钙 结 石 形 成 的 抑 制 作 用 》 研 究 ， 发 现 钙 通 道 兴 奋 剂 二 羟 吡 啶 可 明 显 抑 制 实 验 小 鼠 尿 钙 的 排 出 及 肾 脏 草 酸 钙 结 石 的 形 成 。 研 究 离 子 通 道 功 能 最 直 接 方 法 是 用 膜 片 钳 技 术 直 接 测 定 通 过 离 子