生物化学实验二：卵黄中卵磷脂的提取和鉴定.ppt

三、实验器材 1、人血清 2、723可见分光光度计 3、台式离心机（4000r/min） 4、离心管 5、试管 6、移液管。 四、实验试剂 1、10%三氯化铁溶液：10.0g FeCl3·6H2O 溶于浓磷酸中，定容至100ml； 2、磷硫铁试剂(P-S-Fe 试剂)：取10%三氯化铁溶液1.5ml于100ml棕色容量瓶内，加浓硫酸至刻度； 3、胆固醇标准贮液：准确称量胆固醇80mg，溶于无水乙醇，定容至100ml； 4、胆固醇标准溶液：将贮液用无水乙醇准确稀释10倍即得，此标准液含0.08mg/mL胆固醇。 5、无水乙醇 五、操作 1、胆固醇的提取 吸取血清0.1ml置干燥离心管内，先加无水乙醇0.4ml，摇匀后再加无水乙醇2.0ml，摇匀，10min后离心（3000r/min-6000r/min）5min，取上清夜备用。 2、比色测定 取干燥试管3支，编号，分别加入无水乙醇1.0ml（空白管），胆固醇标准溶液1.0ml（标准管），上述乙醇提取液1.0ml（样品管），各管皆加入磷硫铁试剂1.0ml，摇匀，10min后，分别转移至比色杯内，用可见分光光度计在560nm处比色。 管号/试剂 空白管 标准管 测定管 无水乙醇 1.0ml 胆固醇标准液 1.0ml 乙醇抽提液 1.0ml 磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml A560 注：磷硫铁试剂须沿管壁缓缓加入，与乙醇液分成两层，立即迅速振摇20次，放置10min（冷却至室温）后，于560nm进行比色，以空白管调零读取各管吸光度。 六、计算 100ml血清中胆固醇的质量（mg） A1C0 m= ÷0.04×100 A0 注意事项： 1、颜色反应与加磷硫铁试剂混合时的产热程度有关，因此，所用试管口径和厚度要一致；加磷硫铁试剂必须与乙醇分成两层，然后混合，不能边加边摇，否则显色不完全；磷硫铁试剂要加一管混合一管，混合的手法、程度也要一致；混合时试管发热，注意勿使试管内液体溅出，以免损伤衣服、皮肤和眼睛。 2、所用试管和比色杯均须干燥，浓硫酸的质量很重 要，放置日久，往往因为吸收水分，而使颜色反应降 低。 3、空白管应接近无色，如带橙黄色，表示乙醇不纯， 应用去醛处理。 思考题： 影响血清胆固醇浓度的因素有哪些？ 喜迎新春 喜气洋洋 商务部《出口鳗鱼技术指南》项目 水产饲料企业高级管理干部培训班 Xiamen University 厦门 翔安 2015年03月19日 实验二：卵黄中卵磷脂的提取和鉴定 Xiamen University 生物化学实验 卵磷脂的概况 1844年法国人Gohley从蛋黄中发现卵磷脂(蛋黄素)， 并以希腊文命名为Lecithos(卵磷脂)，英文名为Lecithin， 也自此揭开了其神秘的面纱。 卵磷脂是生命的基础物质，人类生命自始至终都离不 开它的滋养和保护。卵磷脂存在于每个细胞之中，更 多的是集中在脑及神经系统、血液循环系统、免疫系 统以及肝、心、肾等重要器官。 磷脂是一类含有磷元素的脂肪化合物，通常是卵磷脂（磷脂酰胆碱，简称PC）、脑磷脂（磷脂酰乙醇胺，简称PE）、肌醇磷脂（磷脂酰肌醇，简称PI）、磷脂酸（简称PA）、丝氨酸磷脂（简称PS）等的混合物，其中最典型的是前三种。 磷脂是一种成分复杂的甘油脂，水解后可以的到甘油、脂肪酸、磷酸、胆碱、胆胺、肌醇等化合物。一般大豆磷脂分子中的脂肪酸为软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和花生烯酸。 R1-COO-CH2 R2-COO-C—H CH2 —O—P—O—R OH O 1 2 * 3 R1 常为饱和脂肪酸如C16，C18 R2 常为不饱和脂肪酸如花生四烯酸 R= —CH2CH2-N(CH3)3 OH 卵磷脂 + - 卵磷脂彻底水解的产物是什么？ 卵磷脂的化学结构 CO2-CH2 CO2-CH CH2O -P-O-CH2CH2-N(CH3)3 O O + 非极性端 疏水端，亲油端 磷脂分子中同时具有疏水基和亲水基。正是由于这种特点，使得磷脂类化合物在细胞中起着重要的生理作用。 - 极性端 疏油端，亲水端 H-OH 目前我们食用磷脂的主要来源是大豆磷脂和蛋黄磷脂。除此之外，牛奶、动物的脑、骨髓、心脏、肺脏、肝脏、肾脏以及大豆和酵母中都含有卵磷脂。 卵磷脂在体内多与蛋白质结合，以脂肪蛋白质(脂蛋白)的形态存在着，所以卵磷脂是以丰富的姿态存在于自然界当中，如果能摄取足够种类的食物，就不必担心会有缺乏的问题，同时也