大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定-最新年文档.docxVIP

大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定 Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Vitro Cultivation and Appraisal ZHANG Ai-xia 1 ， 2 1.Life science college of Jiaying University Meizhou，GuangdongProvince ，514015 China ；2.Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering Sun Yat-Sen University ， Zhongshan ， Guangdong Province ，510080 China [] Objective To establish the rat bone marrow mesenchymal stem cells （ BMSC）s separation of training method， and morphological observation ， phenotype and multi-directional differentiation ability of detecting. Methods He whole bone marrow adherent cultivation method in rat BMSCs ， morphological observation under a microscope ， flow cytometry instrument to detect cell surface markers CD29 ， CD44， CD45， and induced to osteogenesis and into fat rat BMSCs differentiation. Results The cells cultured separation is given priority to with spindle cells ， a swirling growth. CD29 ， CD44 were positive expression and CD45 were negative. Into fat osteogenesis after induction ， oil red O and alizarin red S staining were positive. Conclusion The whole bone marrow adherent cultivation method of separation of cells with the biological characteristics of mesenchymal stem cells with multi-directional differentiation potential. BMSC作为多能干细胞的一种，由于其取材方便，具有多向 分化潜能，有较弱的免疫抗原性，体内植入反应较弱，正逐渐受 到学者们的广泛关注。BMSC不仅可以分化为成骨细胞、脂肪细 胞、肌细胞等 [1-2] 胞、肌细胞等 [1-2] 中胚层来源的细胞，它还具有强大的横向分 化潜能，除了向间质组织分化外， BMSC还可跨越胚层限制向外 胚层的神经元、神经胶质细胞等外胚层分化，向胰岛样细胞、肝 细胞等内胚层来源的细胞分化。 BMSCS勺细胞增殖分裂模式使外 源基因易于导入和表达，BMSCs已成为重要的再生医学种子细胞 [3-4] ，具有重要的临床应用前景。 体外成功分离培养BMSCs是实验研究和临床应用的重要前 提。该实验应用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠 BMSC，s 并观察 其生物学特性及成骨和成脂的分化潜能， 为BMSCS勺体内外研究 应用奠定基础，现报道如下。 资料与方法 1.1 一般资料 4?6周龄SPF级SD大鼠，雌雄不限，体重 100?150 g,购 自中山大学中山医学院实验动物中心。 1.2 实验试剂 L-DMEM培养基、H-DMEM培养基均购自美国 GIBCOBRL公司; 胎牛血清（FCS、胰蛋白酶均购自 Hyclone公司；Vitamin C、 地塞米松、牛胰岛素均购自 Sigma公司；3 -甘油磷酸钠购自 Calbiochem 公司。兔抗大鼠单克隆抗体 CD29-FITC、 CD44- FITC、 CD45- PE-Cy5 购自 BD phamingen 公司。 1.3大鼠BMSC的体外分离、培养与纯化 取SPF级3?4周龄SD大鼠，断颈处死，75%酉精浸泡5 min。 无菌条件下分离大鼠双侧股骨，并彻底清除附着其上的肌肉组 织，去除两端骨骺，用含 10%台牛血清的L-D