园林植物组织培养 (11).pdf

园艺植物生物技术 Horticultural plant biotechnology 第11章 园艺植物基因分离与克隆 Chapter 11 Gene isolation cloning in Hort Plant 主 要 内 容 基因简述 基因组与cDNA文库构建 基因克隆的主要策略 园艺植物基因工程基础 ：  DNA重组技术  基因遗传转化技术  植物组织培养技术 应用领域：  园艺植物种质的创新  重要园艺性状的遗传改良  抗逆、抗病、品质性状改良 园艺植物基因工程技术要点 发放或进一步培育新优品系 目的基因分离与克隆 转基因植株鉴定（PCR、 目的基因修饰（5’端加上特异 Southern或western杂交， 启动子，3’端加终止子） 表型检测） 植物表达载体构建 植株再生 遗传转化（Ti/Ri介导质粒转化、 转化细胞筛选（用抗生素抗 PEG介导原生质转化、基因枪、 性标记基因-NPTII或抗除草剂 脂质体、花粉管通道法等） 基因，报告基因-NOS、GUS ） GMOs: Genetic Modified Organisms  科学性和精确性：基因水平改造遗传物质  目的性和可操作性：定向改造遗传性状  基因资源共用性：扩展育种范围，打破生殖隔离 研究方向  第一代转基因作物 以抗病虫为主 种植者，消费者 第二代转基因作物 以改善品质、增加营养保健为主 丰富微量元素、维生素和蛋白质、低脂肪，低胆固醇，抗 癌、药用高油酸大豆、改良型动物饲料大豆（含较高蛋白和氨基 酸）、改良型食用大豆（高含糖量、口感好、易消化）、高月桂 酸油菜（含量达40% ）、高硬脂酸油菜 第 1 节 基因简述  基因概念  基因种类  植物基因基本结构  基因基本特性 1 、基因概念  gene——编码蛋白质与RNA的一 段核甘酸序列 植物一生约需1.5-10万个基因， 每时每刻约有15％基因表达 基因工程上游技术，也是整个工作 的基础与核心 2、基因种类 1 ）抗虫基因 Bt、蛋白酶抑制剂基因 （CPTI ）、 植物凝集素 （GNA、WGA ）、a-AI 2 ）抗病毒基因 CP基因 （TMV、CMV、PVX －CP ）、病毒复制酶基因、核糖体失活蛋 白基因 （RIP ） 3 ）抗真菌基因 几丁质酶、B －1 ，3葡聚糖酶、POD酶基因细菌基因、杀菌肽基因、 溶菌酶基因 4 ）抗逆基因 抗除草剂基因 BAR 抗冻蛋白基因 AFP 抗旱基因 PROA （脯氨酶合成酶基因 ） 抗盐基因 甜菜碱合成酶基因 （胆碱加氧酶，甜菜碱脱氢酶BADH ） 抗热基因 HSP 耐涝基因 ADH 5 ）品质相关基因 果实成熟基因： PG反义基因，ACC合成酶反义基因，乙烯形成酶 反义基因 谷贮藏蛋白 （醇溶、球蛋白基因、谷蛋白）基因 脂肪酸组成相关基因，饱和脂肪酸含量 （硬脂酰ACP脱饱和酶反义基因 ） 6 ）产量相关基因 Rubisco ，磷酸葡萄糖合成酶基因，淀粉含量相关基因，ADPG 焦磷酸酶基因 7 ）其它性状基因 甜味基因，激素相关基因，花色基因 ，黄酮类色素生物合成基因 8 ）光合基因 (rbcL,atpA,B,E,F,H,I) NAD