核酸的生物学功能.pptxVIP

第14章 RNA的生物合成－转录; （一）模板和酶; 1.转录模板;; 1.RNA 聚合酶; RNA 聚合酶催化底物合成时形成磷酸二酯键。合成的方向是 5’→3’：即 RNA 聚合酶是沿着模板链的 3’ →5’ 方向移动。 RNA 聚合酶需要的条件： （1）模板 双链 DNA 或单链 DNA 均可作模板；  （2）活化的底物 需要 4 种三磷酸的核苷酸，ATP、GTP、UTP 及 CTP 为反应底物；  （3）二价金属离子 主要是 Mg2+ 和 Mn2+ 。 ;; （1）原核生物的 RNA 聚合酶; 各亚基的作用; （2）真核生物的 RNA 聚合酶; RNA 聚合酶含有两个核苷酸结合位点; 酶与模板的辨认结合;; 原核生物的启动子; RNA poⅠ与 –35 区辨认结合后，酶向下 游移动，到达 –10 区，酶已跨入了转录起始 点，形成相对稳定的酶–DNA复合物，就可以 开始转录。; 存在两个共同的顺序： -25 区 有 TATA 盒，又称为 Hogness盒，基本上都由A、T 碱基所组成，其功能与聚合酶的定位有关，DNA 双链在此解开，并决定转录的起始位点。 -75区 有CAAT盒，其一致的序列为GGTCAATCT，CAAT 盒与转录的起始频率有关。 除启动子外，真核生物基因组中还有一个称为增强子（enhancer）的序列，它能极大地促进启动子的转录活性。; ① 能在很远距离（大于几kb）对启动子产生影响； ② 无论位于启动子上游或下游都能发挥作用。;（二）以DNA为模板合成RNA的过程; （1）转录起始; （2）转录延长;;; ; RNA 聚合酶没有核酸外切酶活性，不能对进入RNA 链的核苷酸进行校正，所以转录的错误频率是每 104 或 105 中有 1 个错误，是 DNA 复制中错误的 105 倍。这种准确性虽较 DNA 复制低，但由于 RNA 转录产物很多，极少数有缺陷的转录产物不会产生有害的影响。;; （3）转录终止; 其一：是富含 GC ，转录产物极易形成二重对称性结构； 其二：是紧接 GC 之后有一串 A（大约6个）。 因此，按此模板转录出来的 RNA 以几个 U 残基而结束，极易自身互补，形成发夹状结构。该结构可使 RNA聚合酶减慢移动或暂停 RNA 的合成。;; 2.真核生物的转录; （2??转录终止;转录示意图（1）;;（三）以RNA为模板合成RNA的过程; （四）RNA的转录后加工; 在一些病毒中存在基因重叠的现象。; 真核生物许多基因是不连续的，或称断列基因（split gene），即一个完整的基因被一个或多个插入的片段所间隔。这些插入片段可有几百乃至上千个碱基，它们不编码任何蛋白质分子或成熟的 RNA。把这些插入而不编码的序列称为内含子（intron），而把被间隔的编码蛋白质的基因部分称为外显子（extron）。; DNA 的转录所转录的基因信息包括内含子和外显子部分。 因而转录出来的所有 RNA 都必须经过加工，除去其中的内含子，并经复杂的修饰才能成为成熟的各种 RNA，如其中的 mRNA 成熟后才能成为合成蛋白质的模板。; 1.mRNA的转录后加工 ; ; （2）真核生物的mRNA的转录后加工;; 2.tRNA的转录后加工; 原核生物 tRNA 的成熟过程较为复杂，包括切割与核苷酸的修饰。多数 tRNA 的前体约比成熟分子大 20％，在 5’ 和 3’ 端都含有多余的顺序。有些 tRNA 基因的转录前体很大，它包含两个或更多的由内含子分隔的 tRNA 顺序。有些 tRNA 前体在 3’ 端没有 CCA 基，在成熟过程中需要加一个 CCA（氨基酸结合部位）。所有 tRNA 分子中都含有百分率很高的所谓“稀有碱基”，这些稀有碱基的形成是在转录后与切割同时完成的。 ; （2）真核生物的 tRNA 转录后加工; 3.rRNA的转录后加工; 大肠杆菌的 rRNA 是由 3 种 rRNA 丛集在一起形成一个转录单位，彼此由间隙区（内含子）分隔开来。 现在证明，在间隙区中还存在着 tRNA。这些 rRNA 和 tRNA 基因同时转