核酸化学实验技术导学.pptxVIP

《生化实验技术》;第一讲 核酸化学实验技术 第二讲 蛋白质化学实验技术 第三讲 酶学实验技术 第四讲 糖类化学实验技术 第五讲 脂类化学实验技术 第六讲 维生素和辅酶化学实验技术;课堂理论：课前辅导生化大分子基本性质、提取、分 离纯化、含量检测等相关生化物质的分离分析技术。 项目任务：设计案例，引导学生去解决案例问题的方式 向学生布置项目任务、实验设计和实施要求。 实验设计：学生分组——查阅资料——设计实验方案—— 网上递交——教师修改及审核——大组讨论评价 实验操作：各小组（2人）为单位进行实验试剂、器材的 准备，按实验设计完成实验内容操作。 实验论文：根据任务要求，每位学生独立完成课程论文。 课堂讨论：大组为单位进行全班ppt形式交流汇报;课程内容;案例1;什么是转基因食品？;转基因育种的程序？;转基因食品的核酸检测技术;样品基因组DNA的提取 DNA提取质量检测 特有序列的PCR 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 进一步验证：测序、PCR产物酶切鉴定、实时荧光定量PCR方法等;案例2;图1 真菌rDNA转录区和相关引物;设计特定引物对该真菌菌株中的基因组中的rDNA转录区的特定核苷酸片段进行PCR扩增，通过对所获得的PCR产物进行测序分析，与已知真菌序列比对即可确定该菌株在系统分类学上的位置。 ;Primer;实验设计要求： 根据案例提交一个具体解决基因组提取及分离鉴定的实验设计方案，包括从提供的不同材料中提取、分离得到基因组DNA，测定所得DNA的含量、纯度及分子大小，并利用已知引物进行PCR扩增，分析PCR检测的结果。 ;分组题目;实验目标;实验设计需包含的主要技术内容;实验结果要求;基因组DNA提取 4学时 DNA的含量与纯度测定 4学时 DNA的琼脂糖凝胶电泳 4学时 PCR及产物检测 4学时 ;课后研讨题;课后研讨题;相关事项;论文格式模板;研讨课要求; ;保持基因组DNA结构相对完整：防止各种因素引起的降解。 纯度高：尽量排除其他大分子成分的污染（蛋白质、多糖和RNA等）。 得率好：选用合适的方法获得足够量的DNA。;三、基因组DNA提取的原理和方法;细胞破碎;DNA与蛋白质的分离;RNA的去除;含DNA的水相可用1倍体积的异丙醇或2倍体积的无水乙醇沉淀。 基因组的大分子DNA沉淀形成纤维状絮团漂浮其中，可用吸头将其挑出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附在壁上及底部。 如果DNA沉淀量少或无法捞出，可离心获取沉淀。 沉淀DNA前，为提高沉淀效果，可加入NaAC、乙酸铵等盐类促进沉淀。 获取的沉淀需再用70%乙醇洗涤除去残留的有机物、无机盐等。;基因组DNA提取注意事项;特别注意;四、基因组DNA的检测;2、紫外分光光度法测定DNA含量 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收。DNA的紫外吸收峰为260nm。一般在260nm波长下，在pH7.0时每毫升含1μg DNA溶液的光吸收值约为0.020。故测定待测DNA溶液260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。;3、紫外分光光度法测定DNA纯度 当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。DNA纯度的判断根据OD260/OD280值判断，符合要求、纯度高的纯化DNA其比值为1.8。如果样品中污染有蛋白质或酚，其OD260/OD280将明显低于此值。此时无法对样品中的核酸进行精确定量。 ;4、琼脂糖凝胶电泳法测定DNA分子大小 电泳是荷电溶质或粒子在电场作用下发生定向泳动的现象。核酸的分离和鉴定通常采用琼脂糖凝胶电泳。 不同大小、不同形状和不同构象的DNA 分子在相同的电泳条件下（如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等），有不同的迁移率，所以可通过电泳使其分离。琼脂糖凝胶电泳分离后的DNA可用溴化乙啶（EB）染色。;五、PCR检测技术; PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成：;PCR反应示意图;重复循环：变性－退火－延伸这三个过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。 每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩增目的基因扩增放大几百万倍。 ;第一讲 核酸化学实验技术 第二讲 蛋白质化学实验技术 第三讲 酶学实验技术 第四讲 糖类化学实验技术 第五讲 脂类化学实验技术 第六讲 维生素和辅酶化学实验技术;课堂理论：课前辅导生化大分子基本性质、提取、分 离纯化、含量检测等相关生化物质的分离分析技术。 项目任务：设计案例，引导学生去解决案例问题的方式 向学生布置项目任务、实验设计和实施要求。 实验设计：学生分组——查阅资料——设计实验方案—— 网上递交——教师修改及审核——大组