《基因工程B》复习提纲-2020(1)(1).docxVIP

第一章 基因工程概述 分子生物，细胞工程（转基因之后） 载体质粒，病毒 一、名词解释 基因、基因操作、基因工程、重组DNA技术 基因：编码产生蛋白质或RNA等具有特定功能产物的一段具有遗传效应的DNA片段，是控制生物性状的基本遗传单位。 基因操作：基因操作是指对基因进行分离、分析、改造、重组、转移、检测和表达等操作的总称。 基因工程：专指为实践应用而进行的基因重组事件，具体是指通过基因操作来定向改变或修饰生物体，并具有明确应用目的的活动。 重组DNA技术：（基因重组）是指将一种生物（供体）的基因（DNA 片段）与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序。 二、思考题 1、简述基因工程操作的基本步骤。 （1）获得目的基因； （2）目的基因与克隆载体连接，形成重组子； （3）将重组子转入受体细胞，获得转化子； （4）转化子检测和筛选； （5）目的基因在受体中被表达，获得所需的遗传性状或产物。 流程图：接转检酶 2、简述基因工程操作的理论依据。 （1）基因具有相同的物质基础； （2）基因是可切割和粘合的； （3）基因是可转移的； （4）多肽与基因之间有对应关系； （5）遗传密码通用； （6）基因可以复制遗传。 3、简述基因工程诞生理论上的三大发现和技术上的三大发明。 理论上的三大发现：遗传物质是DNA（基因）、DNA的双螺旋结构和半保留复制、中心法则和氨基酸密码子 技术上的三大发明：限制性核酸内切酶、DNA连接酶、基因工程载体 第二章 基因工程的工具酶 一、名词解释 限制性内切酶、同裂酶、同尾酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、逆转录酶 限制性内切酶：是一类能识别双链DNA分子内部某种特殊的核苷酸序列，并使每个核酸链上特定部位相邻的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开的一类核酸内切酶。 同裂酶：指来源不同，但识别相同靶序列，切割产生不同或相同末端的限制性内切酶。（即不同来源的限制性内切酶可切割相同的序列） 同尾酶：指来源各异，识别靶序列各不相同，但切割产生相同末端的限制性内切酶。同尾酶切割DNA得到的产物可进行互补连接。 DNA连接酶：催化DNA片段两侧（相邻）核苷酸的3’羟基（-OH）和5’磷酸基（-P)之间形成磷酸二酯键，使断开的DNA连接起来的酶。 DNA聚合酶：以单链DNA或RNA为模板，在引物（提供3’-OH）的引导下，沿5＇- 3＇方向，利用四种dNTP，催化DNA合成的酶。 逆转录酶：依赖RNA的DNA聚合酶。 二、思考题 1、简述限制性内切酶命名的基本原则。（不考） 影响限制性内切酶活性的因素主要有哪些？ 影响连接反应效率的因素主要有哪些？ 大肠杆菌DNA聚合酶有哪些活性？分别简要说明其主要用途。 5＇- 3＇聚合酶活性：合成双链DNA或cDNA的第二链、补平5＇-突出端； 5＇- 3＇外切酶活性：形成3＇-突出端、切平5＇-突出端、降解RNA； 3＇- 5＇外切酶活性：形成5＇-突出端、切平3＇-突出端。 56选择判断 5、简述切口平移法标记DNA的原理。 答：首先，在Mg2+存在下利用低限量的DNase I处理双链DNA，随机产生少量切口； 然后，利用大肠杆菌DNA聚合酶I的5→3外切酶活性在切口处向3端平移去除核苷酸，同时，其5→3聚合酶活性则将切口作为引物沿5→3方向催化DNA合成； 随着反应的进行，5端核苷酸不断去除，3端核苷酸不断掺入，导致切口沿着DNA合成方向移动，即切口平移。 如果在反应体系中加入标记dNTP，则这些标记dNTP将取代原有的核苷酸残基，产生带标记的DNA分子。 6、简述交换（置换）法标记DNA的原理。 答：反应体系中只有一种标记的dNTP存在时，可利用大肠杆菌DNA聚合酶I或T4/T7 DNA聚合酶的3’→5’外切酶活性从3’端降解DNA， 当露出与该标记dNTP互补的碱基时，上述酶的5→3聚合酶活性则催化该位置发生合成反应，用标记的dNTP置换原来的核苷酸残基，产生3’端标记的DNA。 第三章 基因工程的载体 一、名词解释 载体、质粒、噬菌体、噬菌体溶菌周期、噬菌体溶原周期、克隆载体、表达载体、穿梭载体、整合载体、表达标签 载体：在基因工程操作中，能携带外源DNA进入受体细胞的DNA分子。 质粒：独立于染色体外的能自主复制的双链共价闭合环状DNA分子。 噬菌体：是感染细菌、真菌、藻类、放线菌或螺旋菌等微生物的病毒的总称。 噬菌体溶菌周期：感染宿主细胞后立即在菌体内复制和合成蛋白质外壳，重新组装成噬菌体颗粒，并导致宿主细胞解体，释放出大量子代噬菌体。 噬菌体溶原周期：感染宿主细胞后，将自己的DNA整合到宿主的基因组中，与宿主染色体一起复制，并随宿主细胞的分裂而传递给子代。（原噬菌体可转变为烈性噬菌体，进入裂解周期） 克隆载体：