医学微生物学实验课件：5梅毒TRUST和粪便分离.pdf

实验五粪便标本分离-III 内容： 1、操作：梅毒TRUST检测 2 、示教镜：螺旋体和螺杆菌 3 、操作：粪便分离-生化反应、药敏试验 4 、细菌基因组DNA提取 梅毒螺旋体抗体检测 非梅毒螺旋体抗原（Non-Treponemal）法 利用心磷脂与梅毒螺旋体IgM/IgG等抗体的交叉反应建立 Wassermann （1906年报道，属补体溶血抑制试验） VDRL （显微观察絮凝反应，脑脊液神经性梅毒诊断） RPR （活性炭黑色颗粒指示絮凝） TRUST （甲苯胺红色颗粒指示絮凝） 梅毒螺旋体抗原（Treponemal）法 血凝（TPHA ，MHA-TP ） 明胶凝集（TPPA） 免疫荧光（FTA-ABS） 酶免（EIA） 梅毒螺旋体制动（TPI） 梅毒螺旋体抗体检测 非螺旋体抗原（Non-Treponemal）试验 螺旋体数量下降后消失，定量检测可用于追踪治疗效果 成本低，适于现场、大样本初筛 • 假阳性，需TP法验证方可诊断 • 假阴性，I期前期及潜伏晚期阴性 螺旋体抗原（Treponemal）试验 使用螺旋体或其蛋白抗原，特异性好 • 成本通常较高 • 抗体不随自愈、治愈消失，不适于治疗跟踪 梅毒螺旋体反应素检测 快速血浆反应素试验（Rapid Plasma Reagin, RPR） TRUST试验（Tolludine Red Unheated Serum Test） 心磷脂-胆固醇-卵磷脂 病人血清 复合抗原 （含反应素） 活性炭或甲苯胺红颗粒 黑/红色凝集颗粒 梅毒螺旋体反应素检测操作 1、每组1人做阴性/ 阳性对照，另1人做2份待检品。在纸 卡圈外标记样品名 2 、纸卡平放，分别吸取50l阳性/ 阴性对照或待检样品， 均匀铺加在纸卡圆圈中 3 、TRUST试剂摇匀，以专用滴管及针头垂直滴加1滴至 纸卡圆圈中心位置，勿接触对照和待检样品！ 4 、水平方向轻轻旋转摇动纸卡约8分钟。 5 、结果判断：阴、阳性对照是否正常？待检品？ RPR/TRUST 粪便标本分离培养实验 粪便标本采取、保存（甘油 保存液）、送检 I. 分离培养 分区划线接种麦康凯平板 革兰染色 II. 纯培养 肉汤接种（增菌） III. 纯培养 药敏试验 接种生化反应条 IV. 结果观察 氧化酶试验 实验报告 药敏试验  肉汤菌液轻拨混匀，无菌棉签蘸少量菌液均匀涂布 于琼脂平板表面，待菌液稍吸收后以镊子夹取药敏纸片、 有字面向上贴在各区中央部位，轻压使稳定粘附。  无菌操作！下周实验课尽量带尺 生化反应  API (Analytical Profile Index) 生化反应条  API 10 S - 12个生化反应，用于鉴定肠杆菌科常见和 典型种属 生化反应操作 无菌操作！  试验条的准备： 试验条接种前需37℃孵育  湿室： 3ml无菌水均匀倒入反应条底板的凹槽内  细菌混悬液制备： 由混匀肉汤菌液中以接种环取2环菌液至3ml无菌 生理盐水中混匀，550nm比色OD值为0.125-0.25之间 生化反应操作 无菌操作！  加稀释菌液至反应孔 所有反应孔中加一半菌液至