生物化学与分子生物学：17 DNA操作.pptVIP

ddNTP dNTP 目 录 三、DNA自动测序 采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。 DNA自动测序结果举例 目 录 * * 7版教材图21-11，493页 三、PCR的基本反应步骤 变性 95?C 延伸 72?C 退火 Tm-5?C 5? Primer 1 5? Primer 2 Cycle 2 Cycle 1 5? 5? 5? 5? 5? 5? Template DNA PCR技术的工作原理 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? Cycle 3 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 25～30 次循环后，模板DNA的含量可以扩大100万倍以上。 （一）目的基因的克隆 （二）基因的体外突变 （三）DNA和RNA的微量分析 （四）DNA序列测定 （五）参与基因突变分析的检测 四、PCR的主要用途 PCR诱变 在引物中引入非配对碱基，通过PCR引物可以在扩增产物中引入点突变， 目的基因1 目的基因2 内参actin