分子诊断学：染色体疾病的分子生物学检验.pptVIP

假阴性：0/28 = 0% 假阳性：0/373 = 0% 47,XY,+21[26]/46,XY[24]：Z = 4.77 46,XX,der(21;21)+21 : Z = 9.59 T21检测结果 假阴性：0/3 = 0% 假阳性：0/398 = 0% 假阴性：0/12 = 0% 假阳性：0/389 = 0% T13检测结果 T18检测结果 X/Y染色体检测结果 假阴性 假阳性 XO： 0% (0/6) 0.51%(2/395) XXX： 0% (0/1) 0% (0/400) XXY： 0% (0/1) 0% (0/400) (fluorescence in situ hybridization ,FISH） 1986年Pankel在原位杂交基础上，将放射性同位素标记改用非放射性同位素即荧光素标记探针而建立了技术。利用该技术，可以精确地把一DNA片段定位到某条染色体的特定区带上。 图示：利用21号染色体特异性探针对一位高龄妊娠妇女进行产前诊断，未培养的羊水细胞进行荧光原位杂交, 显示所检测的细胞均 有3个杂交信号,经选择性人工流产后确诊为Down综合征患儿。 （primer in situ labeling，PRISH） 是将特异性寡核苷酸引物与已变性的DNA模板退火，然后在dNTP（其中一种脱氧核苷酸已标记）及TaqDNA聚合酶存在的条件下使引物延伸并被标记，由于这一反应体系中引物延伸将严格遵循碱基配对法则，从而保证了标记的特异性。 有可能引物原位标记技术在检测染色体非整倍体的产前诊断中成为FISH的替代方法。 利用引物原位标记技术诊断18三体综合征 a:18号染色体引物特异性地标记未培养的正常羊水细胞间期核可见2个荧光信号； b:18三体综合征间期核可见3个荧光信号。 a b （DNA fiber-FISH） 该技术是新建立的可目视的高分辨基因组制图技术。DNA fiber-FISH的杂交及检测步骤基本与中期染色体或早中期染色体的FISH相同，但与FISH技术相比，其分辨率更高。因此，DNA fiber-FISH技术主要应用在人类基因组物理制图、染色质结构分析，以及染色体病、肿瘤和某些遗传性疾病的分析研究上。 多重连接探针扩增技术（multiplex ligation-dependent probe amplification ,MLPA）是一种针对待检DNA序列进行定性和半定量分析的技术。该技术高效、特异，在一次反应中可以检测40--50个核苷酸序列拷贝数的改变，目前已经应用于多个领域、多种疾病的研究。 1、高效：一次反应可以检测40--50个靶序列拷贝数的改变 2、特异：可以检测点突变 3、快速：一次实验可以在24小时内完成 4、简便：不同的试剂盒操作基本相同，容易掌握 优 点 1、需要精确测量DNA的浓度，样本容易被污染 2、不能用于单个细胞的检测 3、MLPA用于检测基因的缺失或重复，不适合检测未知的点突变类型 4、不能检测染色体的平衡易位 局 限 性 1、检测染色体亚端粒的基因重排—基因诊断和产前诊断 2、检测染色体的非整倍性改变—染色体非整倍遗传病检测产前诊断 3、检测单核苷酸的多态性（SNP）和点突变　 分子标记 目前已被广泛应用于基因片段缺失与重复、点突变及甲基化检测等相关疾病的分子生物学研究。 （comparative genomic hybridization,CGH） 该技术是在基因组水平上对染色体变异部位的检测与定位相结合，进行准确的定量定位分析，并且不需要细胞培养，特别适用于恶性肿瘤获得性染色体结构异常的研究。 可在基因组水平上对染色体变异部位进行准确的定量定位分析； 不需要细胞培养可对肿瘤基因组DNA的拷贝数进行定性分析与定量分析； 对细胞遗传学难以判断的肿瘤染色体的某些成分（如双微体、标记染色体）的来源进行鉴定； 快速检出染色体三体性、单体性和部分染色体大片段重复的拷贝数变化，有利于对先天畸形、自然流产等疾病进行快速诊断。 （chromosome painting） 　　 是将FISH技术和染色体原位抑制杂交技术结合，以染色体特异性DNA库为探针，以不同荧光染料涂染整条染色体或染色体特异区段的一种技术。 　　 染色体涂染技术检测结果： 9号染色体短臂完全重复 无损伤产前染色体病分子生物学检验技术 结合母亲年龄的三联筛查， 唐氏综合症检出率:~65%，假阳性率:4.5-5.0% 增加抑制素A，可以将检出率增加到75% 结合母亲年龄的NT测量，21三体检出率：77%，假阳性率：5%. 结合生化分析和颈透明度的唐氏综合症的检测检出率可以达