分子诊断学：移植配型及个体识别的分子生物学检验.pptVIP

移植配型及个体识别的分子生物学检验 第一节：移植配型的分子生物学检验 器官移植是指用自体或异体的正常器官、组织或细胞，置换病变的或功能缺损的器官、组织或细胞，以维持和重建机体的生理功能。 目前影响器官移植成功率的主要因素是机体的免疫排斥反应，配型良好的受者具有较高的长期生存率，因此是移植配型是移植前非常重要的准备工作 移植配型 移植配型就是指在移植之前对供受者抗原的相容性进行检测，又称组织配型，通过移植配型选择移植物，尽量减少供受者的组织相容性抗原差异，提高移植成功率。 ABO血型抗原 人类白细胞抗原HLA 次要组织相容性抗原 组织特异性抗原 一、HLA免疫学及分子生物学基础 白细胞膜上的抗原： ABO血型抗原 白细胞本身特有的抗原 人类白细胞抗原（HLA）,最强同种抗原 同种异体移植时，供受者HLA不相容，会产生免疫排斥反应，其相容性是影响移植后长期生存率的重要因素之一 分子结构与功能 HLA分子由MHC基因编码，人类HLA抗原位于第6号染色体短臂 HLA-Ⅰ抗原的特异性取决于α重链，由HLA-A、B、C位点编码，其β轻链是β2微球蛋白，15号染色体。300种以上 HLA- Ⅱ抗原受控于HLA-D区，由A、B基因分别编码α重链和β轻链， 抗原多态性取决于β轻链。350种以上 HLA-2A、2B和2D抗原由于与造血干细胞移植和器官移植的效果相关，称为“移植抗原” 二、HLA分型技术发展 HLA分型的发展阶段： 混合淋巴细胞培养：受限多，实验繁琐，已淘汰 补休依赖的细胞毒试验：检查移植物细胞膜抗原 蛋白质凝胶电泳 DNA分型 三、分子生物学在HLA分型中的应用 RFLP与PCR-RFLP分型技术：HLA-DR、HLA-DQ、HLA-B44和HLA-C亚型… PCR-SSCP技术：HLA-A、HLA-DRB1、HLA-DQB1… 测序技术 PCR-SSO技术 PCR-SSP技术 基因芯片技术 FACS技术 氨基酸残基配型标准分型技术 合理选择HLA基因分型技术 分型方法标准化 根据需要选择不同的分型技术 第二节：个体识别的分子生物学检验 法医物证学是运用免疫学、生物学、生物化学以及分子生物学的理论和方法，通达人类遗传标记的检验与分析，对生物学检测的种类、种属及个体来源进行鉴定 个体识别 亲子鉴定 性别鉴定 种族和种属认定 一、个体识别和亲子鉴定的概念 个体识别：对两物证材料进行同一性认定，又称同一认定，属于法医物证学。有体态、性别、年龄面貌等，但某些遗传标志是最有效的方法 亲子鉴定：通过对人类遗传标记的检测，根据遗传规律分析，对有争议的父母与子女血缘关系的鉴定。 二、相关遗传学及分子生物学基础 DNA的个体特异性（ID） 双等位基因遗传标记 DNA的长度多态性和序列多态性 HLA分型技术，RFLP也称为指纹技术 VNTR及STR技术 线粒体DNA测序多态性分析 SNP技术 全基因组PCR扩增技术 种族和种属认定 三、个体识别的主要分子生物学技术 第一极体的均分是在减数第二次分裂是进行的，它无同源染色体，含有一半人体染色体数的四分体（此时已不能叫做四分体，因为四分体特指同源染色体配对联会时的形态）。分裂时，连接在同一染色体上的着丝点分开，四分体分裂成两条染色体，分别向细胞两极移动， * 第一极体的均分是在减数第二次分裂是进行的，它无同源染色体，含有一半人体染色体数的四分体（此时已不能叫做四分体，因为四分体特指同源染色体配对联会时的形态）。分裂时，连接在同一染色体上的着丝点分开，四分体分裂成两条染色体，分别向细胞两极移动， * 第一极体的均分是在减数第二次分裂是进行的，它无同源染色体，含有一半人体染色体数的四分体（此时已不能叫做四分体，因为四分体特指同源染色体配对联会时的形态）。分裂时，连接在同一染色体上的着丝点分开，四分体分裂成两条染色体，分别向细胞两极移动， * 第一极体的均分是在减数第二次分裂是进行的，它无同源染色体，含有一半人体染色体数的四分体（此时已不能叫做四分体，因为四分体特指同源染色体配对联会时的形态）。分裂时，连接在同一染色体上的着丝点分开，四分体分裂成两条染色体，分别向细胞两极移动， *