基础化学课件：第十三章 可见分光光度法和紫外分光光度法.pptVIP

第十三章 可见和紫外分光光度法 第一节物质的吸收光谱 【例13-1】已知某化合物的相对分子质量为251，将此化合物用乙醇作溶剂配成浓度为0.150mmol?L-1的溶液，在480nm波长处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8%，求该化合物在上述条件下的摩尔吸光系数?及质量吸光系数a。 【解】 由Lambert—Beer定律可得 已知 c= 0.150?10-3mol?L-1，b = 2.00cm，T =0.398，代入公式，得： 如果溶液中同时存在D、E对光有吸收的物质，在同一波长下只要不互相影响，即不因共存物的存在而改变本身的吸光系数，则吸光度等于各共存物吸光度之总和，即： 在已知 时的 、 、 和 时的 、 、 的情况下，可以求出D、E混合溶液中cD、cE的值。 【例13-2】测试酶与腺苷酸(AMP)体系的吸光度如下：A(280nm) = 0.46， A(260nm) = 0.58。 试计算每一组分的浓度。 吸收池厚度为1.00cm。 已知：酶的?(280nm) =2.96?104L?mol-1?cm-1 ?(260nm) = 1.52?104L?mol-1?cm-1 AMP的?(280nm) = 2.4?103L?mol-1?cm-1 ?(260nm) = 1.5?104L?mol-1?cm-1 【解】 设酶和AMP的浓度分别为y和z 。因吸光度具有加和性，所以：?为260nm 时 ： 0.58 = 1.52?104?1.00 ? y+1.5?104?1.00 ? z ?为280nm 时： 0.46 =2.96?104?1.00 ? y+2.4?103?1.00? z 解方程得：y =1.4?10-5 （mol?L–1） z =2.5?10-5 （mol?L-1） 即：酶的浓度为1.4?10-5 mol?L–1，AMP的浓度为2.5?10-5 mol?L-1 。 作 业 第261页：6、8、10 一、 掌握分光光度法的基本原理，Lambert—Beer定律以及透光率、吸光度、摩尔吸光系数、质量吸光系数、百分吸光系数等基本概念及相互关系。 二、 熟悉物质对光的选择性吸收，吸收光谱的意义。 三、 了解光的基本性质，光的加和性； 四、 了解可见分光光度法的测定方法—标准曲线法和标准对照法。 本章基本要点 * * * * * * 第十三章可见分光光度法和紫外分光光度法 Visible Spectrophotometry and Ultraviolet Spectrophotometry 分光光度法的一个重要特点是灵敏度高，被测物质的最低可测浓度可达10-5mol?L-1~10-6mol?L-1，故特别适用于微量及痕量组分的测定。分光光度法测量的相对误差一般为2%～5%，精密的仪器可减至1%左右。 分光光度法的特点 分光光度法(spectrophotometry)是一种现代仪器分析方法，它的理论基础是物质的吸收光谱和光的吸收定律。 根据所用光源波长的不同，分光光度法可分为三类： 可见分光光度法 ：380nm~780nm 紫外分光光度法：10nm~380nm 红外分光光度法 ：780nm~3?105nm 分光光度法的分类 单一波长的光称为单色光，由不同波长组成的光称为复色光。白光(日光、白炽灯光等) 就是一种复色光，它是由红、橙、黄、绿、青、 蓝、紫等颜色的光按一定的强度比例混合而成的。若两种颜色的光按适当的强度比例混合可成白光，则这两种光称为互补色光。 一、物质对光的选择性吸收 互补色光示意图 光照射某物质，物质能够吸收光，使原有的基态转为激发态，只有当分子的能量(h?)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(?E)相等时才能被吸收。 M(基态)+ h? ??M*(激发态) 物质对光的吸收具有选择性，若溶液选择性地吸收了某种颜色的光，则溶液呈吸收光的互补光。如CuSO4溶液选择性地吸收白光中