食品生物技术原理：第三章 细胞工程与食品产业.pptVIP

动物细胞工程的具体应用 1）疫苗生产 2）干扰素生产 3）单克隆抗体生产 4）其他基因重组产品 2、植物细胞工程 单倍体植物 孤雌生殖 孤雄生殖 无融合生殖 植物细胞工程具体应用 生物制药与植物疫苗 人参皂苷 紫杉醇 疫苗食品 思考题 1、细胞工程及其主要内容 2、细胞培养的基本过程 3、举例说明植物细胞培养的方法 4、细胞融合技术的原理及方法 5、细胞重组技术 摇瓶悬浮培养注意事项 选择合适的外植体 诱导疏松易碎的愈伤组织 选择合适的培养基 培养液的灭菌 悬浮培养 悬浮细胞的继代与选择 摇瓶悬浮培养方法 分批培养：在新鲜的培养基中加入少量的细胞培养。（有诱导期、对数期、稳定期和死亡期） 半连续培养法：在反应器中投料和接种培养一段时间以后，将部分培养液和新鲜培养液进行交换。 连续培养法 在反应器中投料和接种培养过程中，不断抽取悬浮培养液，注入等量的新鲜培养液的培养方法。 4.5花粉培养 过程：无菌条件下取出花药或从花药中取出花粉粒---置于人工培养基上---形成花粉胚或愈伤组织---花粉植株（单倍体） 4.6 原生质体培养 过程：纤维素酶或果胶酶除去细胞壁---原生质体---培养基---愈伤组织---诱导出叶、茎、根---完整植株 原生质体培养的应用 1）提高变异频率 2）为应用细胞工程技术进行遗传重组提供材料，细胞融合和基因转移的基础。 5、动物细胞培养 5.1 定义 动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工无菌条件下的生长增殖，在整个过程中细胞不出现分化，不再形成组织。 5.2 培养类型 根据细胞是否贴附于支持物上生长的特性，培养的细胞可分为两大类：悬浮型和贴附型。 悬浮型细胞是指生长时呈悬浮状态的细胞; 贴附型是指贴附于支持物上生长的细胞。 5.3 培养基的成分 氨基酸 维生素 盐类 葡萄糖 有机添加剂。如：核苷、柠檬酸循环中间体、丙酮酸、脂类及其他各种化合物。 激素和生长因子等。如：血清（小牛血清、胎牛血清、人血清）。 5.4 培养过程 原料（动物胚胎或幼龄动物的脏器、肌肉组织）---剪碎---胰蛋白酶消化为单细胞---洗涤---稀释---分装---培养（37℃，CO2） 几个名词 从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养，称为原代培养(primary culture). 细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程，称为传代(subculture)。 进行一次分离再培养，称为传一代，初次培养的首次传代成功后，即成细胞系，一般可传30-50代。 细胞系的维持，就是通过换液、传代、再换液、再传代实现的。细胞系的保存一般进行冰冻。 5.5 应用 动物细胞培养生产： 疫苗 干扰素 激素 其他免疫试剂等。 第三节 细胞融合技术 Cell Fusion Technology 1、定义：在一定条件下，将两个或多个细胞融合为一个细胞的过程。 细胞融合，又称细胞杂交。 动物细胞可以直接融合 植物细胞、微生物细胞去壁---原生质体（protoplast）---融合 原生质体的融合 2. 细胞融合过程 促融因子作用下---细胞凝集---细胞质膜粘连---细胞质融合---培养过程中发生核融合---杂种细胞 物种间杂交、种内杂交---基因重组---育种---优良品种 3. 细胞融合的方法 1）生物学法：采用病毒促进细胞融合。如仙台病毒、疱疹病毒、天花病毒等，能诱导细胞融合。 2）化学融合法：采用化学融合剂使细胞融合。如PEG（聚乙二醇）、DMSO（二甲亚砜）、甘油酸酯等。钙离子参与。 3）电融合法：电场脉冲刺激，使细胞膜透性增加，促进融合。 4、微生物原生质体融合 1）微生物去壁处理：酶法， G+：溶菌酶， G-：溶菌酶+EDTA 酵母菌：蜗牛酶Helicase 丝状真菌：纤维素酶，纤维素酶+蜗牛酶 霉菌：壳聚糖酶+其他酶（如纤维素酶） 2）融合：PEG融合or电融合 3）培养：高渗培养基 4）检验重组菌株。 5、植物细胞融合过程 细胞分离---原生质体制备---原生质体融合---杂种细胞筛选以及培养---愈伤组织---分化根、茎、叶---完整杂种植株 植物原生质体融合 1）原生质体制备 取材与除菌---酶解---分离---洗涤---鉴定 2）融合： 化学融合or电融合 3）培养：含有渗透压稳定剂的medium培养，产生细胞壁，转移到生芽、生根medium上，再生植株。 4）鉴定 显微镜鉴别：大小、颜色等。 互补法筛选杂合细胞：生长互补、抗性互补、营养缺陷型互补等方法。 细胞生物学与分子生物学方法：染色体核型分析、染色体显带分析、同工酶分析、核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）、随机扩增多态性DNA（RAPD）分析等。 植株的形态特征鉴别：高矮、大小、产量、颜色等