食品生物技术原理：第二章（1） 基因工程的基本原理及基本过程.pptVIP

中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 四、生产食品添加剂及功能食品 生产氨基酸 生产黄原胶 超氧化物歧化酶（SOD）基因工程 生产保健食品的有效成分 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 8、脂质体导入法 将DNA或RNA包埋于脂质体内，然后进行脂质体与细胞膜的融合，通过融合导入细胞。 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 9、转化酵母菌 醋酸锂法 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 （五）植物细胞转化技术 植物细胞转化技术是指将重组DNA通过生物、物理、化学的方法导入植物细胞以获得转基因植物的技术。 重组DNA载体转化法 基因直接转化法 ● ● 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 载体转化法 1、农杆菌介导的基因转化 1983年1月，比利时的Montagu M. V和美国的Frally R.首先报道。 是目前应用最广泛、最成功的转基因技术。 ● ● 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 2、病毒衍生载体转化 优点 缺点 载体比较小，便于操作 高效率感染植物细胞 高水平表达外源基因 载体容量有限 没有证据表明是否能整合到植物基因中 外源基因遗传不稳定 ▼ ▲ ▲ ▲ ▼ ▼ 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 3、载体转化的具体方法 创伤植株感染法 原生质体共培养法 叶盘法 ● ● ● 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 植物细胞外源基因的直接转化法 是指不需要载体，而利用物理、化学的方法将外源基因导入受体植物细胞的技术。 在单子叶植物的基因转移中应用较多。 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 1、电击法 2、基因枪法 3、激光微束穿孔法 4、细菌圆球体融合法 5、多聚物介导法：PEG法 6、花粉管通道法 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 （六）重组体的筛选与外源基因的鉴定 区分转化细胞和非转化细胞，淘汰未转化细胞。 抗除草剂基因 抗生素抗性基因：卡那霉素 ● ● 重组体的筛选 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 转基因检测 1、报告基因的检测法 报告基因和目的基因一起被转入受体细胞。 报告基因是受体细胞本身基因组中不存在的。 具有易于检验的表型。 ● ● ● 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 （1）GUS基因 大肠杆菌的β 葡萄糖苷酶基因 β–D-glucuronidase,GUS 5-溴-4-氯-3-吲哚-β–D-葡萄糖醛酸 水解产物 酶 （蓝色） （无色） 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 （2）NPTII基因 细菌转座子Tn5的新霉素磷酸转移酶基因。 α-32P-dCTP 新霉素 α-32P 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 （3）CAT基因 细菌转座子的氯霉素乙酰转移酶基因。 乙酰辅酶A 14C氯霉素 酶 放射性的乙酰氯霉素 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 （4）NOS基因 农杆菌Ti质粒上的胭脂碱合成酶基因。 胭脂碱 紫外光下 直接检测 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 （5）LUC基因和GFP基因 荧光素酶基因(luciferase) 可转化植株发出微弱的光，用灵敏仪器或Ⅹ-光片可直接检测。 水母的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein) 基因产物经一定波长紫外光照射可激发出绿色荧光。 ● ● 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 2、PCR检测法 从待检植株DNA中是否能扩增出目的基因片段。 阳性对照：质粒DNA 阴性对照：非转基因植株DNA 阴性对照：空白对照 快速，灵敏，简便 假阳性多，易污染 特点 ● ● 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 3、分子杂交检测方法 探针的制备 基因探针(probe)是一段与目的基因互补的核酸序列，它可以是DNA，也可以是RNA，通过与待册测样品DNA或RNA进行核酸分子杂交，可以判断两者的同源程度。 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 放射性同位素标记法 缺口平移法 随机引物法 ● ● 非同位素标记法 生物素标记法 酶标记法 半抗原标记法 ● ● ● 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 分子杂交 1、点杂交：dot blot 2、Southern吸印杂交:Southern blot 3、Northern吸印杂交:Northern blot 4、Western 杂交:Western blot 5、菌落原位杂交 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 总DNA提取 酶切 电泳 变性成单链 吸印到膜上 固定 杂交 压片 X光片显影 Southern杂交 确定基因是否转入受体细胞并整合到受体细胞基因组中。 中国农业大学食品学院采后生物技术实验室 Northern杂交 确定DNA已经转入