疟原虫的镜检技术#x2d;#x2d;2010年.pptxVIP

疟原虫的镜检技术王用斌j iningite@yahoo. com. cnn疟疾的实验室诊断1. 病原学诊断：显微镜血涂片查见疟原虫，这种 镜检确诊最可靠。2. 免疫学诊断：（1）循环抗原的检测（2）循环抗体的检测3. 分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用于疟疾 術诊断。分子生物学、血清学技术发展迅 猛，但是确诊疟疾的“金标准”仍 然是血液显微镜检査。III疟原虫的镜检技术1 .血膜制作与染色。2. 厚、薄血膜中间日疟、恶性 疟各期疟原虫的形态结构及 其鉴别要点。3. 镜检示教。血膜的制作（所需设备）1 .载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分钟, 干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干 净柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片浸泡于洗涤剂溶 液中1-2天，或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1-2小时，再放 入新配置的洗涤剂溶液中1-2小时，逐个擦去血膜痕迹， 清水漂洗干净，擦亮。2. 采血针：一次性3. 玻片盒：防止污染和昆虫吸食血膜4.75%酒精棉球：采血前后消毒5.记号笔：玻片上书写号码血膜的制作（取血肘间）?采血时间现症病人和流调普查时可不考虑取血时机，但在诊断 或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。?疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗 期和间歇期五期。?间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育,因原虫密度太低，镜 检多为阴性；发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体胀破红细 胞期，镜检多见裂殖体和环状体；发热期外周血中以环状体（小 滋养体）为主；出汗期因原虫密度太低,镜检多为阴性；发作后 数小时（h）,间歇期外周血中以大滋养体为主,形态较易辩认, 为诊断的有利时机。发作36-48h,可检出裂殖体；发作1-2次后, 配子体出现较多。?恶性疟较理想的取血时间是在发作后20h内取血，初发患者退热 后常查不到原虫。取血部位和方法耳垂或无名指，通 常在耳垂取血，先用 75%酒精棉球消毒取血 部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖， 右手持消毒针迅速刺入 皮肤，不宜过深或过浅（1?2mm为宜）。然后 用左手大拇指、食指和 右手中指协同轻轻挤压 出血滴。血膜的制作用于检查疟原虫的血涂片有两种:种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种 是血液涂成圆盘状，称厚血膜。最好一张 玻片上同时制作厚、薄两种血膜。薄血験涂片操作III薄血膜取洁净的載玻片1 张，左手持载玻片平置，右手 持推片，推片一端边纟彖的市 点刮取血液1.0?1.5微升（相 当于1/4火柴头大小），使血 滴与平置的载玻片中线接触 待血液向两侧扩展约2cm宽时 以25。?35。夹角均匀而迅 速地向左推成舌状薄血膜 （约2. 5cni长）。也可载玻片平置在桌面上操 作厚度以薄血膜上的红细胞之间互 相接触而不相互車叠为佳。正确的推片姿势厚血膜涂片操作III用推片的一角刮取4~5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴涂于载玻片的中央偏右 处，由里向外一个方向旋材2~4南，涂成直径0.8~L0cm的圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求（厚度 以1个油镜视野内可见5~10个白细胞为宜）。血膜的制作 （血膜的位置）通常将厚、薄血膜涂在一张载玻 片上。方法是将载片分为6等分，第1 2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在 第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至 第6格中部。III■ I1III7AIIIFA标准的疟疾厚薄血膜片位置各种不同的疟疾血片涂制法:标签标准血片（1人）门诊发热病人血片ri人丿居民普查血片 Q人）血膜的制作（编号）.膜编号血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码，以防差错；待薄 血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上受检者的个人编号5依次按顺序插入标本盒内。制作血膜注意事项1. 清洗玻片）且勿碰撞、磨损载玻片必须完全清洁 无油渍或污垢。制片时，手指勿接触玻片表面，以免油 污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻 片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内 厚血膜未干前 勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不 角,屋处不易溶血和着色而影購检查结果；晾干血膜时 应注意防尘，防止苍蝇、蟬螂等昆虫吮吸血膜；干后应 及时装入标本盒并盖严。3.血膜应自然干燥 切忌在毒太阳下晒或火烤，加快 其干燥可采用手上或衣服摩擦、风吹，干透后才能用甲 醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24-48h内固定染色；冬 天也不能超过72h。放置时间越久，厚血膜越不易溶血, 染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固 定（1?3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干后 装入盒内盖严，待以后染色。iU染液的种类染液种类：目前临床上应用最广泛 的是瑞氏(Wright stain )和吉氏染液