4%多聚甲醛的配制.pdfVIP

； 4%多聚甲醛的配制 : 0.1M PBS配制 80g NaCl 2g KCl 14.4g Na2HPO4 2.7g KH2PO4 溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCl 调节溶液的 pH值至 7.4 ，最后加蒸馏 水定容至 1L 即可。 在 15lbf/in2(1034 ×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少 20 分钟），保存 存于室温或 4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中 , 将 4 克多聚甲 醛(EM级) 溶解于 100ml PBS,加入数滴 NaOH,在通风厨中 60℃加热 ( 打 开瓶盖 ) 使溶解 , 冷却至室温 , 用 HCl 调节溶液的 pH值至 7.4 , 使用前 新鲜配制 . 4% 多聚甲醛固定液： 用途： 进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。 动物灌注固定及后固定 （动物器官经该液 灌注后，然后取材，再用该液浸泡 2-24 小时）也常选该固定液固定。 试剂： 多聚甲醛 40g PBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml 混合后加热至 60 ℃，搅拌并滴加 1N NaOH 至清亮为止，冷却后加 PBS 至总量 1000 ml 。 注固定时间 24 小时。 我们实验室一直沿用的 4 ％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是： 多聚甲醛（粉末状） ：40g 磷酸二氢钠： 2.965g 磷酸氢二钠： 29g 蒸馏水： 1000ml ’. ； 然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（ 60 ℃）振荡 24 小时。 原来一直用的挺好，配出来也很清亮。 但是这几次也是用同样的方法配出来后， 在加热时是清亮的， 但是瓶底有不少不溶的杂质。 等不 再加热，室温后，溶液就混浊了。再加热到 60 度又清亮了。再冷却到室温后又混浊了。 不知 道为啥？请高手指点一二，不胜感激 4 ％多聚甲醛固定液 里头的陪法有点小技巧 : 多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的 ,先加多聚甲醛和 氢二钠 ,直接在通风情况下加热溶解 ,一般 15 到 20 分钟就可以 ,大概放置 20 分钟后再加二氢钠 , 溶解后 ,调 PH 直到 7.2 左右即可 , 最后别忘记放 DEPC. 其实武汉博士德就有 4 ％多聚甲醛固定液 卖的 ,我们以前都是自己配 ,一是麻烦 ,二是要用到 DEPC, 有毒而且易挥发 ,还带香味 , 闻到后喉龙就不舒服 . 后来就直接找他们买了 ,方便便宜 , 省事 ,最主要 的, 他们专业点 , 东西好用 ! 你要考虑以下几过因素 : 1.蒸馏水洁净 . 2. 三角烧瓶洁净 . 3.试剂没问题 . 多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在 37 度温箱里若干天再去看它会有惊喜。以前用过磁力搅拌 棒转一上午都不行，放在一边过几天再看就溶解了。 如果要求中性多聚甲醛就用 pbs 或者用磷酸氢二钠 + 二氢钠，如果不要求中性用水就可以啦 我要做免疫组化实验。用 ABC 法， DAB 显色。 组织的固定液， 查外文资料用的都是 4 ％多聚甲醛／ 0.1M PBS 。但是实验室的老师说， 是用 0.01M 的 PBS 配制，不知道是不是一样的？ 还有就是冲洗液，我查的英文资料都是用 0.