生化分离工程：3-2-1 HPLC.pptVIP

高效液相色谱法HPLC  High Performance Liquid Chromatography  与经典液相色谱法的区别：填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法 。 因分析速度快称为高速液相色谱 HSLC。 是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术 高效液相色谱系统 采用高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱 样品由流动相带入柱内，在柱内被分离 成分依次进入检测器，由记录仪、数据处理系统记录并处理色谱信号。 举例 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点 速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成 分辨率高，选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg 柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备 HPLC缺点： 价格昂贵，要用各种填料柱， 容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。 发展趋势： 向生物化学和药物分析及制备型倾斜。 三. 高效液相色谱仪组成 梯度混合器 按规定精密吸取一定量的供试液，注入色谱仪测定 六通阀进样原理图 高效分