培训中心项目5：水环境监测仪器使用与维护、培训中心、任务1水环境监测仪器使用技术培训讲义-高效液相色谱仪的使用.docVIP

国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 《水环境监测仪器使用与维护》培训讲义 项目名称 高效液相色谱仪的使用 学时 8学时 职业标准 相关知识点 1、高效液相色谱分析法基本原理 2、Laballiance高效液相色谱仪的结构 3、Laballiance高效液相色谱仪的使用方法 4、高效液相色谱仪附件的使用 相关技能点 1、Laballiance高效液相色谱仪的使用 2、高效液相色谱仪附件的使用 重难点 Laballiance高效液相色谱仪的使用 参考资料 《仪器分析》 天津大学出版社 《仪器分析》化学工业出版社 一、高效液相色谱分析法基本原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离度，采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱分析方法。 与气相色谱法不同，高效液相色谱法更适合于热稳定性差，不易挥发（相对分子质量较大）的许多物质的分离和分析，因而应用更为广泛。据统计，在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱法分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱法进行分析。高效液相色谱法不仅可分析组成简单的样品，若采用梯度洗脱操作技术，能对许多组分复杂、极性宽泛的样品进行分析。 根据分离原理，高效液相色谱法可分为液-固吸附色谱、液-液分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱等等。高效液相色谱最常用的检测器是紫外吸收检测器，此外还有示差折光检测器、荧光检测器、电导检测器等。 二、Laballiance高效液相色谱仪的结构 高效液相色谱仪由检测器（本实验中采用紫外-可见检测器）、高压输液泵、色谱柱、柱箱、进样系统、电路系统、数据处理系统等部分组成。 三、Laballiance高效液相色谱仪的使用方法 ①开启稳压电源，打开计算机。先打开高效液相色谱仪抽液泵电源，然后打开检测器，调节检测器波长为测量波长（丙酮紫外吸收波长为292nm），预热30min。 ②调节流动相流速为1mL/min，打开泵开关，然后进入分析之星色谱工作站。在对话框中输入：用户名（DEMO）后按回车进入软件系统。软件系统包含：再处理、批处理、比较、配置、用户代码、采集1、采集2、采集3、采集4和退出共10个操作按钮。可根据分析需求选择不同的操作按钮。本试验做丙酮含量测定，选择采集1按钮，点击进入后可进行基线采集并观察基线是否在零点，如果基线不在零点可用检测器右侧的“ZERO”按钮进行调节。待基线稳定后，点击“STOP”按钮即可停止基线的采集。 ③点击操作菜单中蓝色按钮“RUN single”进入样品测定对话框。输入样品名、调用分析方法和图谱保存路径后点击“启动”进入样品测定界面。 ④用微量注射器吸取适量待测样品，旋开进样阀，将注射器的枕头扎入进样阀中，迅速将待测样品注入，快速关闭进样阀。待样品中所有组分的图谱测定完毕，点击“STOP”按钮，停止测定。 ⑤测定结束后点击“Analyse”按钮，显示峰号，峰面积和保留时间等，点击“Rports”即可查看分析结果。 ⑥所有实验结束后，退出工作站。 ⑦用85%的甲醇水溶液冲洗色谱柱30min以上。 ⑧停泵，先关闭检测器电源，然后待柱压降至50psi以下时，再关闭泵电源，最后关闭稳压电源。 四、高效液相色谱仪附件的使用 1、高压输液泵 高压输液泵是将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱柱中。其稳定性直接影响到分析结果的重现性、紧密度和准确性，因此其流量变化通常是小于0.5%，同时因为色谱柱很细，填充颗粒很小，阻力很大，流动相流过色谱柱时产生很大的压力，所以高压输液泵通常能耐40~60MPa的高压。输液泵的种类很多，目前应用比较广泛的是并联式双柱塞泵和液压隔膜泵。 2、进样器 进样器是将样品准确送入色谱柱的装置，要求密闭性好，似体积小，重复性好，进样引起色谱分离系统的压力和流量波动要很小。进样系统包括取样和进样两相功能，实现这两项功能又常用手动六通阀和自动进样两种。