植物组织培养：花药和花粉的培养.pptxVIP

花药和花粉的培养; 概念 花粉或花药培养是指用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花粉或花药，通过无菌操作技术，接种在人工培养基上，改变花粉的发育进程，诱导其细胞分裂、分化，最终由单个花粉粒发育成完整植株。 花药培养属于器官培养，花粉培养属于细胞培养;花药暗培养三个月后， 愈伤组织从花药分化出来;花药和花粉发育过程 花药和花粉培养的发展史 花药和花粉培养的意义 花药培养 花粉培养 单倍体植株加倍 ;花药和花粉发育过程 花药和花粉培养的发展史 花药和花粉培养的意义 花药培养 花粉培养 单倍体植株加倍 ;花的结构模型;花药横切照片; 花药的发育过程;花粉的发育过程;B: 单核 C: 双核 D: 三核 E: 成熟;成熟花粉的形态;花药和花粉发育过程 花药和花粉培养的发展史 花药和花粉培养的意义 花药培养 花粉培养 单倍体植株加倍 ;1921年，Bergner等发现曼陀罗能够产生自然单倍体（Science） 1964年，Guha和Maheshwari通过曼陀罗花药培养得到胚状体。（Nature） 1969年，Nitsch用烟草花药培养出单倍体植株（Science） 1972年，Sharp等用看护培养从番茄花粉诱导单倍体植株（Planta） 八十年代统计：23科、52属、153种，花药培养成功;;;;我国花药和花粉培养的简史;作物：有30多种开展了培养试验，有20多种获得了花粉植株，小麦、黑麦、玉米。 园艺植物：大白菜、青菜、甘蓝、茄子、番茄、葡萄、苹果、柑桔等等得到了单倍体植株。 ;花药和花粉发育过程 花药和花粉培养的发展史 花药和花粉培养的意义 花药培养 花粉培养 单倍体植株加倍 ;（一）基础理论上研究的利用 1．人工花粉培养是研究减数分裂和花药生长机制的重要方法； 2．花药和花粉培养可进行生理、生化、遗传等基础理论的研究； 　　优点：花粉数量多、体积小、形态比较一致、便于人工控制。 3．高等植物的自然突变率低，在10－6～10－9之间，培养皿中诱变处理，提高突变率。;（二）单倍体育种 1．可以获得纯合的双单倍体； 2．与杂交育种比较可缩短世代，提高选择率； 3．有利于远缘杂种新类型的培养和稳定； 4．与诱变育种相结合，可以加速育种过程。 300多个双单倍体品种中，大麦和水稻各有100个品种，油菜有50个品种;;花药和花粉发育过程 花药和花粉培养的发展史 花药和花粉培养的意义 花药培养 花粉培养 单倍体植株加倍 ;（一）操作流程;1．消毒健状花蕾　　　 自来水洗　　　 75%酒精10秒　　无菌水洗1次　 10%NaClO溶液　 无菌水洗3次 2．接种　 花蕾　　滤纸吸水　　 镊子剥开取花药　　　去掉花丝　　 接种培养基（20－30个花药/10ml 试管） 3．培养　恒温　　 23－28℃ 　　　　 光照　　 11－16小时/天　 　　　　 光照强度　2000－4000Lux ;;;胚状体诱导生芽; 1. 基因型：植物材料的异质性 植物材料的遗传类型，影响花药的培养。茄科花药培养成功率最高。 同一种内不同品种，不同来源的材料、花药培养效果不同。 ;; 2. 花粉发育时期 大多数品种离体花药最佳反应时期是小孢子有丝分裂前后或期间，多数园艺植物以采用单核中后期或双核早期的药粉培养，诱导产生愈伤组织或胚状体的频率较高； 细胞学观察推测，双核期花粉中开始逐渐积累淀粉，就不能使花粉发育成植株 This occurs because microspores would only respond to embryo formation at a developmental stage when they are not committed to develop into pollen grains; 确定取样时期的方法 染色方法：醋酸洋红、碘/碘化钾、孚尔根染色、焙花青-铬矾法 实际操作中可根据一定大小的花蕾来确定药粉发育期。 ; 3. 生理状态 所用材料取自大田要比从温室的好； 一般取生长健壮，发育好者；; 4. 预处理 为提高愈伤组织的胚状体形成的比例，可对花药进行各种预处理； 应用最广泛的是低温处理。 0～8度， 3 ～ 14天；温度越低，处理时间越短 除此之外，光周期、高温、甘露醇等处理。 30～35度，12 ～ 16h（短期）; 5. 培养基 常用的基本培养基 MS、