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2021/1/12 小分子性激素测定方法的进展 减少—— 结合蛋白 类似物 前体 代谢产物 ——干扰 直接测定法 经典方法 消化样品 ↓ 萃取有机相 ↓ 分子筛柱别离各类甾体 ↓ 测定 血清直接测定 + 高特异性单抗 + 结合蛋白屏蔽技术 男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，其构造也非常相似；而且普遍与血清中的某些蛋白结合。 因此，皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗传缺陷、血清蛋白异常、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。 2021/1/12 游离甲状腺激素测定方法的进展 常见甲功指标：TSH、FT3、FT4、TT3、TT4 对甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT4＞TT3＞TT4 对甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3 但FT3 、 FT4灵敏度要求高，且易受干扰 发光法进步了灵敏度，使得其临床应用普遍性超过TT4和TT3 两步法 操作时间长 灵敏度差 准确性差 类似物法 操作时间短 灵敏度较好 准确性较好 反向竞争法 〔标记抗体〕 操作时间短 灵敏度更好 准确性更好 第一代〔放免〕 第二代 第三代 血清FT3 、 FT4试剂盒的开展 〔消除结合蛋白对测定的影响〕 测定游离激素的参考方法〔“金〞标准〕：平衡透析法〔透析液过多可导致测值偏高〕 操作复杂、采样量大，不适于临床常规 2021/1/12 游离激素测定法的试金石——稀释实验 以游离T4为例,样品稀释20倍以内测值无明显变化 〔应扣除实验本身对样品的稀释度并注意基质效应,建议用6-8%BSA稀释〕 FT4 + TBG K T4TBG 游离 T4 游离结合蛋白 结合常数 结合T4 其中：K= 由于绝大部分T4呈结合状态，因此：[T4TBG]≈[TT4](总T4); [TBG]≈[总TBG]－[TT4] 故， K≈ 所以，样品被稀释N倍后， [T4TBG] [FT4] [TBG] [TT4] [FT4] ([总TBG]－[TT4]) (固定常数，不变) [TT4] K([总TBG]－[TT4]) [TT4]/N K ([总TBG]/N－[TT4] /N) [FT4]≈ = [TT4]/N K ([总TBG]－[TT4])/N = [TT4] K([总TBG]－[TT4]) 相 同 即， [FT4]≈ 2021/1/12 发光技术—— 临床免疫分析划时代的进步 以TSH(促甲状腺素)为例 第一代 TSH检测试剂盒 普通放免 功能灵敏度1-2mIU/L 根本无法测到正常值 下限以下的血清TSH 对甲亢的诊断意义不大 固相放免 功能灵敏度 在甲亢的诊断中 开场发挥作用 第二代 TSH检测试剂盒 发光免疫 功能灵敏度 成为甲亢诊断的 首选指标之一 新型发光免疫 功能灵敏度 更新了部分临床概念 改写了甲功的调控理论 第三代 TSH检测试剂盒 第四代 TSH检测试剂盒 2021/1/12 目前商品化发光免疫分析产品的几个特点 大多采用全自开工作方式，部分采用微孔板半自动方式 多采用磁性或非磁性微粒包被，以增加外表积，使反响时间缩短 使用内建标准曲线加校正的方法产生工作曲线 部分产品采用流动池测定方式(合适于闪光型发光或电化学发光) 2021/1/12 流动池检测方式示意图 检测器 检测池 负压泵 废液 四通阀 冲洗液 样品管 计量泵 枯燥空气 原位进样泵 氧化剂 优点：构造简单，运行本钱低 缺点：易产生穿插污染，工作效率受限 2021/1/12 标准化——自动化免疫分析系统对试剂盒的技术要求 对仪器的要求：构造简单、运行效率高、故障率低、维护费用少 对试剂盒的相应要求：标准化、成套化、简单化，详细为： 反响/洗涤/测定条件一致；操作步骤少且趋于一致 反响时间短； 通用成分多、专用成分少 措施 统一标记/检测系统 重新优化并统一反响/洗涤/测定条件和操作步骤 改变包被形式： 微粒包被：反响效率↑，反响时间↓；散射干扰↑ 、离子干扰↑ 〔磁珠〕 间接包被：反响效率↓，反响时间↑；散射干扰↓ 、检测效率↑ 注意内源性物质干扰！〔生物素-亲合素系统〕 微粒+间接包被： * * 临床检验中的发光免疫分析讲解 临床检验中的发光免疫分析讲解临床检验中的发光免疫分析讲解由于化学反响〔通常是氧化〕或生物化学反响产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量并产生光子，从而导致的发光现象。与荧光最大的区别在于无需激发光，因此后者也被称为光致发