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一：多糖中的 单糖组分分析 一般对多糖进行完全水解，水解条件：封管 0.5~3M硫酸或 1~6M盐酸，80℃~100℃水解 2.5~8h 即可。或控制水解条件，进行逐步水解，如封管 0.025M硫酸，100℃水解 15min，30min，45min 等，水解液用碳酸钡或氢氧化钡中和，滤液浓缩后可用纸层析、薄层层析、气相层析或高压 液相层析等鉴定。 二：相邻单糖基 连接方式 分析 将甲基化多糖水解得到甲基化的单糖，而此单糖上甲基化之羟基所在的碳原子就是连接键所 在。高碘酸氧化是定量反应， Smith 降解是将高碘酸氧化产物进行还原，酸水解或部分水解， 从高碘酸的消耗量和不同产物的生成， 便可进行糖苷键位置的判断 -产物中若有一分子比例的 甲酸生成而消耗两分子比例的高碘酸根时，表明多糖的非还原末端或非末端部分有 1-6 苷键 相连的单糖基存在； 产物中若有赤藓醇生成， 则提示有 1-4 结合苷键； 若有甘油生成， 有 1-6、 1-2 结合的苷键或有还原性末端葡萄糖基等；若产物中能检出单糖，如葡萄糖、半乳糖、甘露 糖等，则有 1-3 苷键存在。结合 13C-NMR 确定连接位置。 三： 端基碳苷键构型 分析 1：酶解实验：不被淀粉酶水解的多糖，无 α-苷键，与纤维素酶有作用者，存在 β -苷键。 2；IR ：α-型差向异构体的 C-H 键在 844±8cm￣1处有一个吸收峰； β-型的 C-H 键在 891±7cm￣ 处有一个吸收峰。但是，海藻糖、阿洛糖和异阿洛糖的 α-型和 β-型同时存在的情况下，就 不能以次来判断。 3：1H-NMR ：端基碳的δ值大于 5.00ppm者，糖苷键为α-型，小于 5.00ppm者，则为β-型。 4；13C-NMR ：α-型连接的 C?化学位移在 97-101ppm，β-型的在 103~105ppm。对甘露聚糖 不能用化学位移判断 α-型或β-型。可用裂分常数决定， 一般1Jｃ-ｈ=170HZ，为α-型，160HZ 者为β-型。 四：不同苷键组成 比例及直链或环状 结构分析 不同糖苷键糖基比例分析可通过测 13C-NMR 光谱相对面积来完成。 可通过连接苷键的 C-1 相 对峰面积的测定确定苷键糖基的比例。 α-（1-4）在直链和环状结构中其 C?与 C?的化学位移 值均有差异，与文献值对照便可判断是直链或是环状结构。在 IR 中：一般地，吡喃糖苷在 1100-1010 cm￣1间有三个强吸收峰，而呋喃苷在相应区域只有两个峰。 以上摘自盛家荣等多糖的提取、分离及结构分析广西师院学报（自然科学版） 1999年 12 月第 16卷第 4 期 一：多糖的 纯度检查 ： 1：比旋度法：比旋度相同者为均一组分。 2：超离心法：多糖在离心力场作用下形成单一区带，说明微粒具有相同沉降速度，表明其分 子的密度、大小和形状相似。 3：高压电泳法。 4：凝胶过滤法：由于凝胶具有一定大小的孔径，不同形状和大小的多糖分子在凝胶层析柱中 移动速度不同，其流出液经示差检测仪检测，如只有一个峰，则表明为均一组分。 5：纸层析法：取多糖水溶液点样于新华中速或慢速滤纸上，在室温下展开，显色，进行纯度 检测。 6:冻融法:取多糖溶液经过反复冻融，应无沉淀析出。 7:光谱扫描法 :采用紫外光谱在 180～640nm波长间扫描，在 260nm、280nm处应无核酸和蛋白 质的特征吸收峰。 二：多糖的 定性检测 理化性质 主要包括溶解性、硫酸 -咔唑反应（阳性）、蒽酮-硫酸试剂反应 （阳性）、苯酚-硫酸 试剂反应（阳性）、斐林试剂反应 （还原糖试验 ）、双缩脲试验 （阴性）、碘-碘化钾反应 （阴性）、茚 三酮反应 （阴性）、三氯化铁反应、十六烷基三甲基溴化铵 （CTAB）络合反应、比旋光度、特性 粘度、电导率及 PH值等。 红外光谱 （IR） 分析 红外光谱成是糖结构研究重要手段之一。主要用于不同糖的鉴别、糖苷 键及糖构型的确定、糖键上主要取代基的识别等。常用的是将干燥的多糖用 KBr 压片法在 400～4000cm 区间扫描做红外光谱分析。 核磁共振 （NMR） 糖的核磁共振波谱主要是 1H、13C核磁共振波谱。多糖在 1HNMR 谱图上， 大多集中在 δ4．0～ 5．5ppm范围内。而 13C NMR 主要应用于多糖结构分析，如异头碳的构 型问题、多糖残基中取代位置和分枝点的确定、多糖中各残基种类和比例的确定等。与用于 糖类化合物结构研究的经典方法相比，高磁场 NMR 方法能产生较完全和详细的结构信息，并 且可以在有或没有背景知识的情况下获得糖类化合物最完全的结构信息及其在溶液中或固态 的行为，同时还可通过计算机把样品的 1H和13C NMR谱数据与数据库信息进行比较来确定糖 类化合物的结构。此外， 2D-NMR 、NOE及 1N、