基因治疗的原理与研究进展.pptxVIP

基因治疗的原理与研究进展第1页/共96页会计学第2页/共96页基因治疗分类体细胞(somatic cell)基因治疗生殖细胞(germline)基因治疗只限于某一体细胞的基因的改变只限于某个体的当代对缺陷的生殖细胞进行矫正当代及子代第3页/共96页 内容提要一、基因治疗的策略二、基因转移技术 三、基因干预四、治疗基因的受控表达五、基因治疗的应用研究第4页/共96页 一、基因治疗的策略The Strategy of Gene Therapy第5页/共96页 （一）基因置换（gene replacement） 定义：指将特定的目的基因导入特定细胞，通过定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。 目的：将缺陷基因的异常序列进行桥正。 对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变。 第6页/共96页基因同源重组技术又称为基因打靶(gene targeting）定点整合的条件:转导基因的载体与染色体上的DNA具有相同的序列。带有目的基因的载体就能找到同源重组的位点，进行部分基因序列的交换，使基因置换这一治疗策略得以实现。第7页/共96页要实现基因置换，需要采用同源重组技术使相应的正常基因定向导入受体细胞的基因缺陷部位。定向导入的发生率约1/100万，采用胚胎干细胞培养的方法，这种同源重组的检出率最高可达1/10。第8页/共96页（二） 基因添加 基因添加或称基因增补（gene augmentation）: 通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。类型:在有缺陷基因的细胞中导入相应的正常基因，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能；向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因，利用其表达产物达到治疗疾病的目的。第9页/共96页（三）基因干预基因干预（gene interference）: 采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。第10页/共96页（四）自杀基因治疗自杀基因治疗:恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。原理:将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应，从而达到清除肿瘤细胞的目的。第11页/共96页自杀基因的作用机制 第12页/共96页1.自杀基因系统?TK/GCV 单纯疱疹病毒（herps simplex virus, HSV）Ⅰ型胸苷激酶（thymidine kinase, tk）基因编码胸苷激酶，特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷（ganciclovir, GCV）转变成毒性GCV三磷酸核苷，后者能抑制DNA聚合酶活性，导致细胞死亡。?CD/5-FC 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase, CD）基因，在细胞内将无毒性5-氟胞嘧啶（5-FC）转变成毒性产物5-氟尿嘧啶（5-FU）。第13页/共96页2. 旁观者效应 旁观者效应:“自杀基因”治疗不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。 第14页/共96页（五）基因免疫治疗 通过将抗癌免疫增强细胞因子或MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。 第15页/共96页二、基因转移技术 The Technique of Gene Transfer第16页/共96页基因治疗的两种途径靶细胞ex vivo载体目的基因in vivo第17页/共96页 基因转移(gene transfer)技术： 1.病毒介导的基因转移系统。 2.非病毒介导的基因转移系统。第18页/共96页 1.病毒介导的基因转移系统 病毒载体介导的基因转移效率较高，因此它也是使用最多的基因治疗载体。据统计，有72%的临床实验计划和71%的病例使用了病毒载体，其中用得最多的是逆转录病毒载体。第19页/共96页 （1）逆转录病毒 Retrovirus第20页/共96页第21页/共96页 逆转录病毒前病毒的结构特点 （1）两端各有一长末端重复序列LTR。 （2）LTR由U3、R和U5三部分组成。 (1)在U3内有增强子和启动子； (2)U3和U5两端分别有病毒整合序列(IS) ； (3)在R内还有poly(A)加尾信号。 （3）病毒有三个结构基因(1)gag基因，编码核心蛋白和属特异性抗原；(2)pol基因，编码逆转录酶；(3)env基因，编码病毒外壳或包膜糖蛋白(包括外膜糖蛋白和穿膜蛋白)。 （4）5ˊ端LTR下游有一段病毒包装所必需的序列（ψ）及剪接供体位点(SD)和剪接受体位点(SA)。 （5）含有负链DNA转录的引物结合位点(PBS)和正链DNA转录的引物结合位点(PPT)。第22页/共96页第23页/共96页逆转