M原核基因的表达调控模式全讲课文档.pptVIP

CRP-cAMP与上游DNA位点结合后造成模板DNA沿对称序列中央发生90°的弯曲 第三十页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 CAP结合位点 cAMP是由腺苷环化酶（adenylate cyclase） 催化合成 CAP（catabolite activator protein，分解代谢物激活蛋白） CAP以两种方法来激活转录： （1）它可能直接和RNA Pol相互作用； （2） 作用于DNA，改变其结构，从而帮 助RNA Pol结合。 第三十一页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第三十二页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第三十三页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第三十四页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第三十五页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第三十六页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 7. 2. 3 lac操纵子的调控区域—P、O区 P区（即启动子区）一般是从I基因结束到mRNA转录起始位点下游5-10bp，而O区（即阻遏物结合区）位于-7～+28位，该区的碱基序列有对称性，其对称轴在+11位碱基对。 1 调控位点： (1) Operator 操纵基因 (2) CAP(catabolite gene activation protein) or CRP(cAMP受体蛋白)结合位点 (3) Promotor 第三十七页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第三十八页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第三十九页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 7. 3 色氨酸操纵子 第四十页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 1、trp 操纵子的结构 第四十一页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 2.特点: (1) trpR和trpABCDE不连锁； (2) 操纵基因在启动子内 (3) 有衰减子(弱化子，attenuator) (4) 启动子和结构基因不直接相连，二者被 前导顺序(Leader)所隔开 第四十二页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 产生阻遏物的基因 辅阻遏蛋白（aporepressor） 当培养基中有色氨酸时，辅阻遏蛋白与色氨酸相结合形成有活性的阻遏物，与操纵区结合并关闭trp mRNA转录。 trpR基因突变常引起trp mRNA的永久型合成 第四十三页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 3.调节 (1) Trp作为辅阻遏物(corepressor) (2)阻遏物和 RNA pol 在P，O重叠区产生竞争性抑制； (3)阻遏物的阻遏能力低，是LacR的1/1000； (4) trpO调节合成代谢，存在衰减作用（弱化作用，attenuation）。 弱化作用是控制RNA聚合酶通读弱化子能力的调控机制. 第四十四页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 第四十五页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 7. 3. 2 弱化子与前导肽 mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，转录总是在这个区域终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录。这个区域被称为弱化子（是位于转录单位开始区的一种内部终止子），该区mRNA可通过自我配对形成茎-环结构。 1、弱化子 在trp mRNA 5’端有一个长162bp的mRNA片段被称为前导区，其中123～150位碱基序列如果缺失，trp基因表达可提高6-10倍。 第四十六页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 2、前导肽 分析前导序列发现，它包括起始密码子AUG和终止密码子UGA，能产生一个含有14个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽。 在前导序列的第10和第11位上有相邻的两个色氨酸密码子。组氨酸操纵子含有7个相邻的组氨酸密码子，苯丙氨酸操纵子也有7个苯丙氨酸密码子，这些密码子参与了操纵子中的转录弱化机制。 第四十七页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 3、mRNA前导区的序列分析 trp前导区的碱基序列已经全部测定，其中4个分别以1、2、3和4表示的片段能以两种不同的方式进行碱基配对，有时以1-2和3-4配对，有时只以2-3方式互补配对。 第四十八页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 RNaseT1降解实验（此酶不能水解配对的RNA）表明，纯化的trp前导序列中确有1-2和3-4的配对方式，由此定位的3-4配对区正好位于终止密码子的识别区，当这个区域发生破坏自我配对的碱基突变时有利于转录的继续进行。 第四十九页，编辑于星期五：十三点 五十二分。 培养基中色氨酸浓度低，负载有色氨酸的tRNATrp就少，翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就慢，当4区被转录完成时