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饲料中粗蛋白质的测定 一、目的 掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并测定饲料中粗蛋白质的含量。 二、原理 饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。凯氏法的基本原理是用浓H SO4 在还原性催化剂(CuSO4、K SO4、 2 2 Na SO4 等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都变为NH ＋，NH ＋立即被浓H SO4 吸收 2 ４ ４ 2 成为(NH) SO4，(NH) SO4 在浓碱作用下放出NH ，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼 4 2 4 2 3 酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿混合指示剂作指示剂，用标准HCL 溶液滴定，求 出氮含量，根据不同饲料再乘以一定的换算系数(通常用6.25 计算)，即为粗蛋白质的含量。 上述原理的主要化学反应如下： 还原性催化剂 1.2CH CHNH COOH+13H SO (NH) SO +6CO ↑+12SO ↑+16H O 3 2 2 加热 4 2 4 2 2 2 2.(NH ) SO4+2NaOH→2NH ↑+2H O+Na SO4 4 2 3 2 2 3.H BO +NH →NH H BO 3 ３ 3 4 2 3 4.NH H BO +HCL→NH CL+H BO 4 2 3 4 3 3 三、仪器设备 1.实验室用样品粉碎机：40 目网筛。 2.分析天平：感量0.0001。 3.电子天平: 感量0.001。 4. 六联电炉: 6×1000W。 5.改良式半微量凯氏定氮仪(图1)。 6.酸式滴定管:25ml。 7.凯氏烧瓶:100ml。 8.烧杯:250ml。 9.三角瓶:150ml。 10.容量瓶:100ml。 11.移液管:10ml。 12.量筒: 10ml 。 13.量筒:25ml。 四、试剂 1.浓H SO ：化学纯,含量为98%，无氮。 2 4 2.混合催化剂：CuSO :NaSO =1:10 化学纯。 4 2 4 3.甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，阴凉处保存 期不超过三个月。此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。在硼酸 吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈兰色。 4.2%硼酸吸收液：溶2 化学纯硼酸于100ml 蒸馏水中，加甲基红—溴甲酚绿混合批示剂0.4ml。 5.40%饱和NaOH 溶液：溶40 克氢氧化钠（化学纯）于100ml 蒸馏水中。 6.0.05mol/l 的HCL 标准液：取分析纯浓HCL(比重1.19)4.2ml，加蒸馏水稀释至1000ml，用基准物质标定。 将基准无水碳酸钠（分析纯）于270-300℃灼烧40 分钟称重，至恒重，准确称取0.013-0.015 克，溶于50ml 蒸馏水中，加2 滴甲基红—溴甲酚绿混合指示剂，用欲配的0.05mol/lHCL 滴定至暗紫红色，记录HCL 用量 W Na CO (g) ２ 3 计算：Ｃ= V HCL ×0.053 五、测定步骤 1.样本的消化： 精确称取饲料样本0.5-1 ，以硫酸纸卷无损的移入消化管中，再加入5 氺硫酸铜0.4 克，无水硫酸钾 或硫酸钠6 克，加10ml 浓硫酸后将凯氏烧瓶放于通风橱的电炉子上消化(为防止消化时液体溅失，可再加 两粒玻璃珠)。 注意：先低温加热(100-200℃)，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失后，提高加热温度(约360-410℃) 至沸腾。消化时要经常