第十二章植物组织培养室的构建及培养基、植物材料消毒液.pptx

第二章 植物组织培养实验室的构建 及植物组织培养基 ; 植物组织培养实验室的构建 ;主要内容： 一、植物组织培养实验室设计 二、仪器和设备 三、玻璃器皿和用具 四、培养条件 ;一、实验室设计 标准组织培养室包括 洗涤室（区） 制备室（区） 灭菌室（区） 储放室（区） 操作室（区） 培养室（区） 观察室（区） 药品室（区）;１、洗涤室（区） 玻璃器皿和塑料器皿 １、洗 包括用自来水、洗液、洗涤剂 清洗 ２、干 包括自然晾干和烘箱干燥;2、药品室 存放常用的化学试剂 无机盐类、有机物、生长调节剂等;3、制备室 完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。 主要设备： 药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器. 培养基的配制 生理生化测定;4、储存室（区） 存放配制后的培养基 或未用完的培养基;5、灭菌室 即消毒室，是培养基、玻璃器皿、塑料 器皿和其他物品消毒灭菌的地方;6、操作室 也称接种室，是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等的场所。主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。 接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。 ;7、培养室 培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。 ;; 植物组织培养材料移到田间前， 先移到驯化室进行炼苗，带生根成活后， 再移到田间苗圃。;二、仪器和设备 1、烘箱 陈列于洗涤室 作用：干燥洗后的器皿 高温干热灭菌 测定培养物的干重 气浴;2、冰箱 陈列于制备室中 作用??低温保存材料，存放药品、培养基母液 激素、酶制剂。;3、灭菌锅 陈列于灭菌室中 类型：普通医用消毒锅 大的高压灭菌锅 作用：培养基、水和各种器皿的消毒;4、超净工作台 陈列于操作室（接种室）中 类型：垂直式和水平式 作用：无菌操作;5、pH计 陈列于制备室中 作用：测定培养基及酶液的pH值;6、显微镜 陈列于观察室中 类型： 倒置显微镜 原生质体观察 普通显微镜 染色体和叶片气孔观察 荧光显微镜 细胞活力观察 解剖显微镜 立体观察;7、天平 陈列于制备室中 作用：称取大量元素、微量元素、酶制剂;三、玻璃器皿及用具 1、玻璃器皿 培养用的：试管、三角瓶、培养皿等 显微镜下观察用的：细胞微室、载玻片、培养皿等。;2、微孔过滤器（细胞过滤器） 灭菌用：如激素 一般用石棉滤膜;3、细胞计数器 统计培养细胞的用具 4、接种用具 如镊子、剪刀、解剖刀、接种针等;思考题 1、一个正规的组织培养实验室应具备哪些房间？ 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？ 3、组织培养的环境条件有哪些？;; 培养基的成分 培养基的制备 培养基的选择 ; 培养基的制备是组培的核心工作，外植体之所以能沿着不同的组培途径生长、分化、成苗都取决于选用不同成分的培养基来调节控制的。;培养基的成分; 1.无机营养成分： ;1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 （C、H、O、N、P、K、Mg、S和Ca） 氮：由硝酸盐和铵盐提供 铵盐过高会引发玻璃化苗;;不同营养条件对植物组织培养的影响-MS Salts ; 碳源：最常用的是蔗糖，提供碳源；维持培养基渗透压。 葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。 麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。 蔗糖使用浓度在2%—3%，常用3%，即配制一升培养基称取30g蔗糖，有时可用2.5%，但在胚培养时采用4%-15%的高浓度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。 ;维生素：