药食同源食品抗氧化评价细胞caa法、血清中8-表氢氧-异前列腺素（8-isoprostane）测定.docxVIP

细胞CAA法 1目的 通过CAA法测定样品对于不同组织细胞的抗氧化效果，进行抗氧化能力评 价。 2原理 CAA方法的基本原理如图所示，荧光探针2,7七二氯荧光二乙酸(DCFH-DA) 本身并无荧光，穿过细胞膜进入细胞后，细胞酯酶将DCFH-DA分解，形成极性 更强的还原型二氯荧光素(DCFH)。2,2七偶氮二异丁基豚二盐酸盐(ABAP)是一 种分散在细胞中的自由基诱导剂，在细胞内可自发分解形成过氧自由基，细胞内 无荧光的DCFH极易在该自由基的作用下氧化生成荧光物DCH,荧光物DCH 可通过多功能酶标仪测定其荧光值，进而得到细胞内活性氧的水平。抗氧化物质 可在细胞膜外部结合氧自由基而阻止其进入细胞，或者在细胞膜内部清除氧自由 基而阻断DCFH氧化成DCF的过程，从而减少DCF的形成，所对应的荧光强 度就会减弱，表明细胞的抗氧化性越强。 3试剂或材料 细胞：SMMC-7721人肝癌细胞，购自中国科学院细胞库。 荧光剂：22-偶氮二异丁基豚二盐酸盐(ABAP)、2g-二氯荧光二乙酸(DCFH-DA), 美国 Sigma-Aldrich 公司。 培养基：基础培养基：RPIM-1640细胞培养基。完全培养基：胎牛血清10%,青 链霉素混合液1%,基础培养基89%O无血清培养基：无菌蒸馅水10%,青链霉 素混合液1%,基础培养基89%。 其它试剂及耗材：胎牛血清(FBS), ExCell B