分子克隆工具酶.pptVIP

DNA片段的同位素末端标记 5’G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T 3’ 3’C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5’ 5’G-C-T-C A-G-C-T-G-OH HO-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5’ T4-DNA pol Mg2+ 5’ppp dN 5’ppp dA（a-32P-dATP） T4-DNA pol 5’G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T 3’ 3’C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5’ 第六十三页，共90页 从T7噬菌体感染大肠杆菌细胞中纯化出来的，由两个亚基组成： 　　① T7基因5编码的大亚基： 　　　有5’?3’聚合酶和3’?5’外切酶活性。 　　② 大肠杆菌编码的小亚基： 　　　增加大亚基对模板的亲和性。 2.3.4 T7-DNA聚合酶 第六十四页，共90页 ① 持续合成能力强 一旦与模板结合就会不间断地合成互补链。 ② 3’?5’外切酶活性高 单链和双链都能降解。 ③ 不受DNA二级结构的影响 其它DNA聚合酶受DNA二级结构的阻碍。 T7 DNA聚合酶的特点 第六十五页，共90页 ② 进行末端标记 ① 以大分子量DNA为模板的合成 如M13 ③ 补平隐蔽末端 3’末端标记。 与T4 DNA聚合酶相同