慢病毒使用操作指南资料.pdfVIP

病毒使用操作指南 一、慢病毒的储存与稀释： A 迅 ? 病毒的储存：用户收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可 以将 病毒暂时放置于 4 °C 保存 ; 如需长期保存请放置于 -80 °C （病毒置于冻存管 , 并使用 封口膜封口） 注： A. 病毒可以存放于一 80°C 6 个月以上；但如果病毒储存时间超过 6 个月， 我们 建议在使用前需要重新滴定病毒滴度。迪 B.反复冻融会降低病毒滴度 : 每次 冻融会降 低病毒滴度 10%;因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融 , 为避免 反复冻融我们 强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量进行分装。 2. 病毒的稀释：用户需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后 , 使用培 养 U 的细胞用 PBS 或无血清培养基（含血清或含双抗不影响病毒感染）混匀分 装后 4 C 保存（请尽量在三天内用完），分装后使用。皿二、慢病毒用于体外 （in vitro ）实 验 : 感染培养原代细胞和建系细胞 1. 慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，用户使用 Inv abio 提供的慢病毒 之前可 以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的 U 的细胞的亲嗜性，感染复数 （M0I 值）以及在体内 （in v i v o ）注射所需要的病毒量。如果没有相关文 献支 持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数 （M0I 值）（使用 2 4 孔板 检测病毒对 目的细胞的亲嗜性） 4 2 .慢病毒感染 U 的细胞预实验 ①慢病毒感染 LI 的细胞预实验注意事项 A. 测定慢病毒对口的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的 （HEK2 9 3T, H e la ）细胞作为平行实验的对照细胞。亠 B. 在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养 LI 的细胞用）稀释 ; 理论 上， 含有血清、双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。必 C? Invabio 提供的病毒单位为 TU/ml , 即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗 粒数。 如：病毒滴度为 ＞1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有 1 XI 0 8 个 具有生物活性 的慢病毒颗粒。 A ② 以 24 孔培养板为例，进行 U 的细胞和 HEK29 3 T 细胞的感染预实验亠 实验前按 照不同的 M0I 设置不同的感染孔，并根据 MO I 和细胞数量计算所需要 的病毒量， 如有必要可以使用 PBS 溶液或者无血清培养基稀释病毒原液皿第一 天，准备细胞： 在 24 孔培养板接种若干孔，每个孔内接种 35X10 4 个 H 的细 胞，铺板时细胞的融 合率为 5 0%左右，每孔培养基体积为 10 0 U1 ；进行病毒 感染时细胞的融合度约为 70%左右。 第二天，观察细胞生长状态，如细胞状态较好则开始实验 ：1 山、取出 4 C 保存的 病 毒，使用台式离心机离心 20 秒（使病毒完全悬于离心管底部即可）；如果是 冻存在 -80C 的病毒需要先在冰上融化后使用。亦可以根